[发明专利]吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂

说明书

技术领域

本发明涉及吩噻嗪衍生物色素的检测方法、利用吩噻嗪衍 生物色素的检测来进行的目的成分的测定方法及用于上述方法 的显色剂试剂。

背景技术

作为目的成分的测定(定性、定量)方法，在实践中广泛 采用利用氧化还原反应的酶法。该方法为例如由欲测定的目的 成分生成氧化物质，用氧化酶催化该氧化物质与通过氧化生成 显色化合物的显色剂反应，测定生成的显色的吸光度的方法。 该方法中，吸光度的大小对应于生成的显色化合物的量，生成 的显色化合物的量对应于生成的氧化物质的量，氧化物质的量 对应于目的成分的量。即，通过生成的显色(生成的显色化合 物)的检测，以如上所述的氧化还原反应为媒介，可间接地测 定目的成分。

上述酶法中使用的显色剂有例如特林德(Trinder)试剂及 N-(羧甲基氨基羰基)-4，4’-双(二甲氨基)二苯胺钠盐(商品 名DA-64；和光纯药公司生产)。此外，生成显色化合物亚甲蓝 等的吩噻嗪衍生物色素的显色剂已知例如10-(羧甲基氨基羰 基)-3，7-双(二甲氨基)吩噻嗪盐(商品名DA-67；和光纯药 公司生产，以下也称“DA-67”)、10-(乙酰氨基羰基)-3，7-双(二 甲氨基)吩噻嗪、专利文献3记载的10-(苯羰基)-3，7-双(二 甲氨基)吩噻嗪、专利文献4记载的10-(3-(甲基羧基氨基)- 六甲基-氨基)-吩噻嗪、10-(3-(甲基羧基氨基)-4-甲基-苯基 -氨基)-吩噻嗪、10-((3-(甲基羧基氨基甲基)-苯基)-甲氨 基)-吩噻嗪、10-(1-萘基氨基)-吩噻嗪、10-(甲基)-吩噻 嗪、10-(苯基氨基)-吩噻嗪、10-(甲氨基)-吩噻嗪等。吩噻 嗪衍生物色素在相对长波长处如590～670nm处有极大吸收，因 此其中生成亚甲蓝等吩噻嗪衍生物色素的显色剂如DA-67等由 于以下原因而受到重视。

即，如体液那样的样品中，除含有目的成分外，还含有各 种成分，其中也存在于500nm附近及其以下的波长区域有吸收 的成分。因此，如上所述的酶法中，为避免目的成分以外的成 分产生的影响，期望由氧化还原反应生成的显色化合物尽量可 在长波长处检测。因此，如上所述生成在590～670nm处有极大 吸收的吩噻嗪衍生物色素的DA-67等显色剂，被认为特别有用。

然而，例如全血样品及血细胞样品那样的含有血红蛋白(以 下称“Hb”)的样品在约570～630nm处显示影响色素检测的程度 的吸收，另外，由于Hb的氧化(met化)而有可能在约570～670nm 处显示影响吩噻嗪衍生物色素检测的程度的吸收。从而，即便 是生成吩噻嗪衍生物色素的如上所述的显色剂，应用于此类样 品时也会担心其对测定的影响。

另外，临床化学专用的自动分析装置检测波长被固定，例 如有分析装置在610～660nm处无检测波长，在700nm处有检测 波长。然而，610～670nm处有极大吸收的吩噻嗪衍生物色素因 在700nm下的检测极为困难，因此无法用这种在700nm处有检测 波长的现有的装置测定。

此外，例如呈蓝色的亚甲蓝通过还原可成为无色的无色亚 甲蓝。利用这种性质，将亚甲蓝等吩噻嗪衍生物色素自身作为 显色剂使用，由目的成分生成还原物质还原吩噻嗪衍生物色素， 通过测定还原导致的蓝色的消失(吩噻嗪衍生物色素的减少) 也可测定目的成分(专利文献1及专利文献2)。然而，即便在该 情况下也会产生与上述同样的问题。

专利文献1：日本特开2000-214152号公报

专利文献2：日本特开2000-214155号公报

专利文献3：日本特公平4-27839号公报

专利文献4：日本特公昭60-33479号公报

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种吩噻嗪衍生物色素检测 方法，其即便在比显示极大吸收的波长更长波长处也可检测吩 噻嗪衍生物色素。

本发明的吩噻嗪衍生物色素的检测方法的特征在于，其为 一种通过吸光度测定来检测反应体系中的吩噻嗪衍生物色素的 方法，所述方法包括吩噻嗪衍生物色素的检测工序，上述检测 工序中，在选自下述式(I)表示的化合物、下述式(II)表示 的化合物及类黄酮系色素所组成的组中的至少一种色素物质的 存在下，进行吩噻嗪衍生物色素的检测。

R¹-N＝N-R²      ...(I)

上述式(I)中，