[发明专利]河豚毒素的生物合成方法

权利要求书

1.一种河豚毒素（TTX）的生物合成方法，其特征在于，所述的方法 包括以下步骤：

从含有一种或多种弧菌的种菌培养基获取培养，所述一种或多种弧菌为分 离自铅点东方鲀的肠中的弧菌；

同时把所述培养和从产生TTX有机体切下的生长组织提取物加入到含有 培养基的发酵器中；所述从产生TTX有机体切下的生长组织提取物来自于铅 点东方鲀的卵巢；以及

从所述发酵器培养基分离纯化TTX；

从所述发酵器培养基分离纯化TTX包括以下步骤：

调节pH并加热所述发酵器培养基；

离心所述培养基；

蒸发从所述离心后培养基得到的上层清液；

混合吸附介质与得到的TTX提取物；

洗脱所述吸附介质；

蒸发从所述洗脱吸附介质中得到的洗脱液；

将得到的TTX提到物上离子交换柱；

干燥所述得到的TTX提取物；

将得到的TTX提取物溶液上第二离子交换柱；

洗脱所述第二离子交换柱；

蒸发上一步所得的洗脱液；以及

干燥所述的洗脱液。

2.根据权利要求1所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，在获 取所述培养前还包括：

从产生TTX有机体切下组织提取物；

加入所述组织提取物到生物反应器；

提取生物反应器混合物到第二生物反应器；

提取第二生物反应器混合物到基质；以及

放置从所述基质得到的培养于培养基中形成种菌培养。

3.根据权利要求2所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 生物反应器为摇瓶。

4.根据权利要求2所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 种菌培养中的所述培养基包括大豆蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖和蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 发酵器培养基包括大豆蛋白胨、酵母提取物、糖、蒸馏水和缓冲液。

6.根据权利要求5所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 发酵器培养基暴露于无菌空气中并不断搅拌。

7.根据权利要求1所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 生长组织提取物包含一种或多种生长因子。

8.根据权利要求1所述的河豚毒素的生物合成方法，其特征在于，所述 方法最多3-5天得到至少0.5mg/L、纯度90%以上的TTX。