[发明专利]用于产生同质糖蛋白的遗传改良酵母

权利要求书

1、遗传改良的酵母，能够产生具有含Man5GlcNac2结构的同质 聚糖的糖蛋白，所述酵母包括下列改良：

a)通过编码抗生素抗性基因的异源序列的同源重组通过插入将编 码α1，6-甘露糖转移酶的Och1基因失活(delta-Och1菌株)，

b)通过同源重组将表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括 选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、 pGAL1、PGK、TEF、adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或 ADH2启动子，含有内质网或高尔基体靶向序列的α-1-2甘露糖苷酶I 编码序列的开放阅读框和转录终止子，

c)通过同源重组将表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括 选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、 pGAL1、PGK、TEF、adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或 ADH2启动子，所述c)中的启动子与b)中的启动子不同，含有需要 产生的外源糖蛋白编码序列的开放阅读框和转录终止子。

2、根据权利要求1的酵母，其特征在于α-1-2甘露糖苷酶I是线 虫的α-1-2甘露糖苷酶I，特别是含有SEQ ID：1的序列。

3、根据权利要求1或2的酵母，能够产生具有75％以上 GlcNacMan5GlcNac2结构的糖蛋白，进一步包括通过同源重组将表达 盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、TEF、 adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子，含有内 质网或高尔基体靶向序列的N-乙酰-葡萄糖胺转移酶I编码序列的开放 阅读框或者转录终止子。

4、根据权利要求3的酵母，其特征在于人类N-乙酰-葡萄糖胺转 移酶I包含没有酶的胞质部分的SEQ ID：2序列，酶的胞质部分被用于 蛋白高尔基体定位的mmn9的胞质部分(SEQ ID：13)所替代。

5、根据权利要求4的酵母，其特征在于其进一步包括通过同源重 组将表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列 SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、 TEF、adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子， 含有人类UDP-GlcNAc转运蛋白编码序列的开放阅读框和转录终止 子。

6、根据权利要求5的酵母，其特点在于人类UDP-GlcNAc转运蛋 白包含SEQ ID：3序列。

7、根据权利要求4至6中的任一项的酵母，能够产生具有75％以 上GlcNacMan3GlcNac2结构的糖蛋白，进一步包括通过同源重组将表 达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、TEF、 adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子，含有内质 网或高尔基体靶向序列的甘露糖苷酶II编码序列的开放阅读框和转录 终止子。

8、根据权利要求7的酵母，其特点在于甘露糖苷酶II是鼠科的甘 露糖苷酶II并且包含SEQ ID：4序列。

9、根据权利要求7至8中的任一项的酵母，能够产生具有75％以 上GlcNac4Man3GlcNac2结构的糖蛋白，进一步包括通过同源重组将 表达盒整合到营养缺陷标记中，该表达盒包括选自分别具有序列SEQ ID：16-26的酿酒酵母或栗酒裂殖酵母的pGAP、pGAL1、PGK、TEF、 adh1、nmt 1、SV40、PMA1、CaMV、pet56或ADH2启动子，含有 N-乙酰葡萄糖胺转移酶II编码序列的，含有内质网或高尔基体靶向序 列的开放阅读框和转录终止子。