[发明专利]胆红素测定方法以及用于胆红素测定的分析用具

说明书

技术领域

本发明涉及胆红素测定方法以及用于胆红素测定的分析用具。 

背景技术

胆红素是在生物体的胆汁中存在最多的色素，主要是由衰老红细胞在骨髓、胸腺、肝脏等中被分解和代谢时作为红细胞主要成分的血红蛋白生成的。由血红蛋白生成的胆红素在血液中与白蛋白结合，被称为非结合(间接)型胆红素。该非结合型胆红素被摄入肝脏中，与葡萄糖醛酸结合而形成结合(直接)型胆红素，并被排泄到胆道中。将所述非结合(间接)型胆红素和结合(直接)型胆红素合称为总胆红素。一般间接型胆红素占总胆红素的大部分。 

测定生物试样中的胆红素的临床学意义如以往公知的那样。例如，可以根据直接型胆红素的增加来预测肝细胞障碍、肝内胆汁淤积、肝外胆汁淤积等，可以根据间接型胆红素的增加来预测胆红素生成量的增加、肝处理功能异常等。如上所述，总胆红素量为直接型胆红素量与间接型胆红素量合计得到的量，因此，例如如果知道总胆红素量和直接型胆红素量，则可以求出间接型胆红素量。 

作为胆红素的测定方法，已知以往有重氮法、钒酸法、酶法、HPLC法等。所述酶法是指下述的方法：使胆红素氧化酶等酶作用于含胆红素的试样，从而使胆红素氧化成胆绿素，使胆红素引起的吸光(最大吸收波长在450nm附近)消失，根据该吸光度的减少量来对胆红素的浓度进行定量。 

在通过酶法测定总胆红素的情况下，由于间接型胆红素与白蛋白结合，因此存在着与胆红素氧化酶的反应耗费时间的问题或反应不充分的问题。为此，公开了添加表面活性剂或其它物质来作为反应促进剂的技术方案(参照专利文献1～3)。 

专利文献1公开了一种液体体系的胆红素测定方法，其中，首先将含 有胆红素的待测物与含有作为直接化剂的胆酸钠或十二烷基硫酸钠(SDS)等的缓冲液混合，然后在该混合物中添加含有胆红素氧化酶的酶试剂。专利文献2公开了一种液体体系的胆红素测定方法，其中，在含有作为反应促进剂的胆酸钠或SDS等的胆红素氧化酶溶液中添加含有胆红素的待测物。专利文献3公开了一种液体体系的胆红素测定方法，其中，为了促进反应，在羟基吡啶衍生物或巯基吡啶衍生物的存在下使胆红素氧化酶与含有胆红素的待测物发生反应。 

专利文献1：日本特开昭59-130198 

专利文献2：日本特开昭62-282598 

专利文献3：日本特开2006-34178 

发明内容

本发明的目的在于提供在使用干燥试剂的胆红素测定中可促进胆红素氧化酶的反应的胆红素测定方法以及用于胆红素测定的分析用具。 

为了达到上述目的，本发明的胆红素测定方法的特征在于，其包含：将生物试样、含有胆红素氧化酶的干燥试剂和含有表面活性剂的干燥试剂进行混合；以及对由该混合产生的变化进行光学测定，其中，所述生物试样与所述含有胆红素氧化酶的干燥试剂的混合在与所述含有表面活性剂的干燥试剂的混合之前进行。 

而且，为了达到上述目的，本发明的用于胆红素测定的分析用具的特征在于，其具备：生物试样的试样供给部、检测部、以及与所述试样供给部和所述检测部连接的流路，其中，胆红素氧化酶和表面活性剂按照下述方式配置在所述试样供给部、所述流路、所述检测部的任意一个中：使所述胆红素氧化酶位于比所述表面活性剂更靠近所述试样供给部的位置。 

本发明的发明人对使用酶(胆红素氧化酶)的胆红素测定方法进行了反复深入的研究，并着眼于下述情况：在使用干燥试剂的胆红素测定中，间接型胆红素与胆红素氧化酶的反应需要时间，如果间接型胆红素的浓度增高，则有时反应不会在规定时间内结束。而且发现，如果在将作为干燥试剂的胆红素氧化酶与测定试样混合后再混合作为干燥试剂的表面活性剂，则能够提高间接型胆红素与胆红素氧化酶的反应效率，能够在短时间 内测定胆红素，从而完成了本发明。另外，以往在液体体系的胆红素测定方法中，如上所述，通常是将表面活性剂等胆红素氧化酶反应的促进剂在与胆红素氧化酶的混合之前或同时地与试样混合的方法(参照上述专利文献1～3)。 

根据本发明，例如能够充分有效地进行测定对象试样中的胆红素与胆红素氧化酶的反应，因此优选地能缩短胆红素测定的时间、和/或能提高胆红素测定的准确性以及重现性。 

附图说明

图1是表示本发明的分析用具的一个例子的图，图1A是俯视图，图1B是在图1A的I-I方向观察的剖面图。 

图2是本发明的分析用具的另一例子的俯视图。 

图3是表示胆红素测定结果的一个例子的曲线图。