[发明专利]基于微滴的过氧化氢测定

说明书

授权信息

本发明依据美国国家卫生研究院授予的DK066956-02和GM072155-02 受到政府支持。美国政府对本发明拥有部分权力

相关申请

除了本申请引用的专利申请以外，本专利申请还与下列申请相关，并 主张其优先权：2007年3月5日递交的美国临时专利申请第60/892,971号， 名称为“基于过氧化氢微滴的测定”，和2007年10月16日递交的美国 临时专利申请第60/980,186，名称为“基于过氧化氢微滴的测定”，其 全部内容作为参考并入本申请。

技术领域

本发明总体上涉及改进的过氧化氢测定领域。本发明特别涉及基于微 滴的过氧化氢测定，以及用来进行这些测定的微滴执行机构。

背景技术

很多种测定都使用过氧化氢作为媒介物对目标分子进行间接分析。例 如，对葡萄糖进行测量时，可利用葡萄糖氧化酶产生过氧化氢，并利用过 氧化氢和过氧化物酶将一底物氧化，产生可检测到的信号，例如颜色变化。 适合的可氧化底物包括Amplex Red(Invitrogen公司生产)和 PS-ATTO(Lumigen公司生产)。本领域存在将过氧化氢分析小型化和/或加速 的需要。

微滴执行机构被用来进行多种微滴操作。微滴执行机构通常包括一基 板，并关联多个电极以便在基板的微滴操作表面上进行微滴操作。微滴执 行机构还可具有顶板，一般将顶板与微滴操作表面平行设置并隔开，形成 一个间隙，微滴操作就发生在该间隙中。间隙内可充满填充液，填充液不 与微滴执行机构上被操作的流体相融。有必要扩展微滴执行机构的能力， 使其能够进行基于过氧化氢测定。

发明内容

本发明提供一种改进的过氧化氢测定，以及用来进行这种测定的微滴 执行机构。本发明的微滴执行机构可进行基于微滴的过氧化氢测定。

在一个实施例中，提供了一种通过过氧化氢测定对分析物进行检测的 方法。该方法包括以下步骤：将过氧化氢测定试剂和样品结合到一微滴中， 该微滴的体积在大约1nL至10μL之间，并在微滴中进行测定，产生可 检测的信号。

在另一实施例中，提供了一种进行过氧化氢测定的方法，包括以下步 骤：将过氧化氢测定试剂和样品结合到一微滴中，并在微滴中进行测定， 产生可检测的信号，该测定产生一个基本上为线性的结果。

在另一实施例中，提供了一种进行过氧化氢测定的方法，包括以下步 骤：将过氧化氢测定试剂和样品结合到一微滴中，并在微滴中进行测定， 产生可检测的信号，其中，基本上所有的分析物都被消耗；对该信号进行 检测；对该信号进行分析，确定分析物在样品中的量。

在另一实施例中，提供了一种利用单一检测器在单一微滴执行机构上 检测多个分析物的方法。该方法包括以下步骤：提供一微滴执行机构装置， 该微滴执行机构装置包括一基板，该基板上关联了多个用来在基板的微滴 操作表面上进行微滴操作的多个电极，以及一个或多个与微滴操作表面连 通的储槽，包括一种或多种用来进行测定的试剂，其中过氧化氢是中间物。

该方法还包括以下步骤：利用微滴操作将多个样品微滴与多个试剂结 合，在单一微滴执行机构上进行多个过氧化氢测定。

定义

以下在本说明书中使用的术语具有如下含义。

“启动”指一个或多个电极结构使一个或多个电极的电气状态发生变 化，并且导致一个微滴操作的产生。

“微滴”指微滴执行机构上具有一定体积的流体，它至少部分地被填充 液约束。例如，微滴可以完全被填充液包绕或是被填充液和微滴执行机构 的一个或多个表面约束。微滴的形状可以是多种多样的，非限定的例子大 致包括：碟形、弹头形、截球形、椭圆形、球形、部分被压扁的形状、半 球形、卵形、圆柱形、以及微滴操作期间形成的各种形状，例如融合或分 离或是该形状与微滴执行机构的一个或多个表面接触时产生的形状。