[发明专利]用于猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒生长的非猿猴细胞

说明书

相关专利申请的交叉引用 

本申请要求以2007年1月12日提交的流水号为US 60884782和2007年8月17日提交的流水号为US 60956597的申请为优先权基础，这些申请中不与本文矛盾的内容均通过引用的方式纳入本文。 

政府资助的研究和开发的声明 

无 

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪的一种病毒疾病，该疾病与曾经重创猪肉产业的任何现有的或以前的感染性疾病相比，每年都会造成最大的经济损失。还被称为“神秘猪病(Mystery Swine Disease)”、猪不育与呼吸综合征(SIRS)及“蓝耳病”的PRRS最初于1987年在北美及于1990年在欧洲被首次检测到。从那时起，PRRS开始在全世界除澳大利亚外的猪生产区成为猪产业的一个主要威胁。PRRS对幼仔和新生小猪的影响最显著。在感染的母猪的一窝幼仔中有多达20-30％的小猪为死胎，在感染的兽群中多达80％的小猪会在断奶前死亡。因此，该疾病会对经济产生破坏性的后果(见Chladek等人的美国专利5476778)。一项部分由国家猪肉委员会(National Pork Board)资助的研究中指出，仅在美国由PRRS造成的损失就超过5.6亿美元(Neumann EJ et al.，2005)。 

对PRRS的研究及诊断和治疗方法的开发(包括新疫苗和疫苗生产技术)受到体外培养PRRS病毒的选择方案的有限可用性的限制。以前，现有技术已知猿猴细胞是用于维持PRRS生长以进行疫苗生产的仅一可用细胞系类型。猿猴细胞系MA-104及相关衍生物(如MARC-145)可能代表迄今为止实际应用于支持PRRS病毒体外复制的唯一选择。 

本发明对于现有技术的改进在于，提供用于操作PRRS病毒的其他选择，例如可支持PRRS生长的非猿猴细胞的实施方案。

其他的结果不如意的方法已经被用于开发用于PRRSV生长的可选 方案。在一种方法中，猪肺泡巨噬细胞可用于PRRSV生长；然而，分离自不同猪的细胞中高水平的固有变异性被认为是一个缺点(见Vincent etal.，2005；Bautista et al.，1993)。在另一种方法中，Weingartl等人在将从12周龄猪获得的原代猪肺泡巨噬细胞转染后建立了猪单骨髓细胞系。经测试这些细胞不能支持PRRSV的复制(Weingartl et al.，2002，Journal ofVirological Methods 104：203-216)。相反，本发明令人吃惊地尤其公开了这样的发现，即来自胎猪的某些细胞确实能够支持PRRSV生长。 

利用本发明所惠及的技术应用包括应用研究方面，例如除了能够在基础研究水平研究PRRS病毒的生长之外，还有兽医疫苗的生产。PRRSV疫苗(其为改良的活疫苗或灭活的死疫苗)可通过本发明的细胞和细胞系产生。用于培养这种具体病毒的工具和相关的方法在生成用于诊断应用的材料的情形中也是重要。在意欲强调科学突破的类似历史情形中，由于体外培养病毒困难及缺乏可选方案，操作人类免疫缺陷病毒(HIV)的能力普遍受到限制。在研究及生成HIV的诊断及潜在疫苗的能力方面的关键进步归因于这样的转折性事件，即能够在体外成功地培养该病毒；见Gallo RC，2002，Historical essay.The early years ofHIV/AIDS；Science 298(5599)：1728-30。 

控制PRRS疾病的主要局限被认为是在于疫苗技术的可用性和有效性。因此用于PRRS病毒生长的创新细胞和方法的贡献可表示以下能力方面的显著进步：即操作PRRS病毒，开发其他的及/或改良的疫苗技术，以及解决PRRS疾病的问题。 

发明内容

本发明在广义上涉及能够繁殖PRRS病毒的非猿猴细胞及使用这种细胞繁殖PRRS病毒的方法。 

在一个实施方案中，本发明提供了一种能够繁殖PRRS病毒的分离的非猿猴细胞，其中所述非猿猴细胞获自动物个体并被培养至少5个传代。 

在一个实施方案中，本发明提供了一种能够被PRRS病毒感染和/或繁殖PRRS病毒的分离的猪胎肺细胞。在一个实施方案中，所述细胞为肺泡巨噬细胞。在一个实施方案中，所述细胞在培养基中繁殖至少5个传代。在一个实施方案中，所述细胞在培养物中繁殖至少10个传代。在一 个实施方案中，所述细胞在培养物中繁殖至少20和/或50个传代。