[发明专利]评价组织保存溶液的方法

说明书

技术领域

本发明涉及评价组织保存溶液的方法。背景技术 

目前，已开发了多种组织保存溶液并用于移植治疗。为开发组织保存溶液，确定了新的组织保存溶液成分和组成，分离自例如大鼠等动物的组织(器官)浸入所述保存溶液中，保存的组织被移植到动物体内或进行生物化学评价以确定保存效果。因此，评价保存溶液的保存效果需要相当长的时间，其使得难以快速开发新的组织保存溶液，因此，需要开发一种更快并且更方便地评价组织保存溶液的保存效果的方法。 

同时，影像策略的最新进展明确显示了细胞和分子的实时生物事件，这使人们容易理解活体动物中表达的生物过程。分子标记的发展，例如来源于水母(维多利亚水母(Aequorea victoria))的绿色荧光蛋白(GFP)、来源于萤火虫(北美萤火虫(photinus pyralis))的萤光素酶等促进了最近十年的变革，使得复杂生化过程与活细胞中的蛋白作用相关起来(非专利文献1、2)。特别的，发光成像提供了在活细胞中研究各种生物过程的重要机会(非专利文献2、3)。生物发光报道物在哺乳动物组织中显示了很高的信噪比，基于此，在正常动物中释放的光信号可通过非侵入性测定方法量化。本发明人因此开发了GFP转基因大鼠、LacZ转基因大鼠和萤光素酶转基因大鼠，并且报道了使用来源于这些大鼠的组织可容易地观察到移植排斥(非专利文献4、5)。非专利文献6公开了即使在来源于GFP转基因大鼠的细胞死亡后，GFP仍然能释放强的荧光。非专利文献1：Science，vol.300(5616)，p.87，2003非专利文献2：Nat.Med.，vol.4(2)，p.245，1998非专利文献3：Annu.Rev.Biomed.Eng.，vol.4，p.235，2002非专利文献4：Biochem.Biophys.Res.Commun.，vol.329(1)，p.288，2005非专利文献5：Transplantation，vol.81，No.8，p.1179-1184，2006 非专利文献6：J.Biomed.Opt.，vol.10(4)，p.41204，2005发明内容 发明所要解决的问题 

本发明的一个目的是提供快速和方便地评价组织保存溶液保存效果的方法。解决问题的方法 

本发明人为达到上述目的进行了广泛的研究，发现组织保存溶液的保存效果可通过以下方式实时评价：将引入发光或荧光标记基因例如萤光素酶等的组织保存于组织保存溶液中作为评价目标，并且测定该保存的组织的发光或荧光水平，其导致了本发明的最终完成。 

因此，本发明涉及以下方面。[1]一种评价组织保存溶液保存效果的方法，包括将引入发光或荧光标记基因的哺乳动物的组织浸入所述组织保存溶液中，浸入后测量该组织中标记基因的发光或荧光水平，以及基于所述发光或荧光水平评价所述组织保存溶液的保存效果。[2]根据[1]的方法，其中标记基因是萤光素酶。[3]根据[1]的方法，其中所述组织中的发光或荧光水平非破裂地测定。[4]根据[1]的方法，其中所述组织分离自引入发光或荧光标记基因的非人哺乳动物。[5]根据[4]的方法，其中标记基因在所述哺乳动物中遍在地表达。[6]根据[4]的方法，其中目标基因在所述哺乳动物的目标组织中特异性表达。[7]根据[1]至[6]任一项的方法，其中所述组织保存溶液是细胞保存溶液。[8]根据[1]至[6]任一项的方法，其中所述组织保存溶液是器官保存溶液。[9]根据[1]的方法，其中所述哺乳动物组织是器官的部分。[10]一种生产具有证实的保存效果的组织保存溶液的方法，包括下列步骤：(I)混合所需组织保存溶液的组成成分，产生所述组织保存溶液；(II)分离部分(I)中获得的组织保存溶液作为样品；(III)将引入发光或荧光标记基因的哺乳动物组织浸入(II)中分离的样品中；(IV)浸入后测量该组织中标记基因的发光或荧光水平；(V)基于所述发光或荧光水平评价所述样品的保存效果；和 (VI)获得作为具有证实的保存效果的组织保存溶液的组织保存溶液，来源于所述组织保存溶液的样品在(V)中被证实具有所需的保存效果。本发明的效果 

使用本发明的方法可非常快速和方便的评价组织保存溶液的保存效果。此外，使用从遍在地引入发光/荧光标记基因的转基因动物分离的组织，可通过一次试验同时评价多种组织的保存效果。这样，使用本发明的方法，可显著改善组织保存溶液的开发速度。附图简述