[发明专利]单克隆抗体8H9的应用

说明书

本申请要求2007年3月22日提交的美国系列号60/896,416和 2007年5月2日提交的美国系列号60/915,672的利益。将前述申请的全部 内容和公开内容引入本申请作为参考。

发明领域

本发明涉及单克隆抗体8H9或其衍生物在治疗癌症患者中的 应用。

发明背景

肿瘤-限制的表面抗原可以是诊断和基于免疫的疗法的靶标。用 于靶向的免疫疗法的理想肿瘤抗原应该不存在于正常组织上，并在肿瘤细 胞表面上大量表达。而且，由单克隆抗体识别的在不同谱系肿瘤细胞上表 达的“通用”肿瘤-特异性抗原可以在基于抗体的策略中具有更广泛的用途。 以前报告了由鼠科单克隆抗体8H9识别的新型58kD表面肿瘤-结合抗原 (参见例如美国专利申请公布US 2005/0169932)。由8H9识别的抗原表达 在神经外胚层、间充质和上皮来源的广谱肿瘤的细胞膜上，其在正常组织 中具有有限的分布。该新型抗体-抗原系统对于肿瘤靶向和免疫疗法是非常 有前途的。

单克隆抗体8H9可以用于肿瘤靶向和成像，和清除肿瘤细胞。 8H9抗原还是针对广谱人类癌症的基于抗体的免疫疗法的潜在靶标，所述 广谱人类癌症包括成神经细胞瘤、脑瘤、促结缔织生成小圆细胞肿瘤、横 纹肌肉瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、PNET、黑素瘤、肉瘤、维尔姆斯瘤、肝 胚细胞瘤、和多种组织源的癌。还已经记述了8H9单链抗体和抗体-融合 构建体的构建(参见例如美国专利申请公布US 2005/0169932)。

本公开内容提供关于利用单克隆抗体8H9改善具有肿瘤细胞 的受试者的预后和/或延长其生存的其他数据。

贯穿本申请，引用多份参考文献。将这些出版物的完整公开内 容引入本申请作为参考，从而更完整地描述本发明所属领域的现有技术。

发明概述

本发明提供改善具有肿瘤的受试者的预后和/或延长其生存的 方法，所述方法包括向该受试者施用包含有效量的试剂的组合物，所述试 剂能够结合由单克隆抗体8H9识别的抗原。

本发明还提供改善具有肿瘤的受试者的预后和/或延长其生存 的方法，所述肿瘤表达由单克隆抗体8H9识别的抗原。该方法包括向该受 试者施用包含有效量的试剂的组合物，所述试剂能够结合由单克隆抗体 8H9识别的抗原。

本发明还提供筛选与单克隆抗体8H9具有相同或相似结合特 异性的抗体的方法，所述方法包括使候选抗体与包含序列SEQ ID NO.15 的多肽、或其片段相接触的步骤，其中与所述多肽结合的抗体是与单克隆 抗体8H9具有相同或相似结合特异性的抗体。本发明还提供通过以上筛选 方法鉴定的抗体。

本发明还提供由单克隆抗体8H9识别的抗原，其中所述抗原与 SEQ ID NO.15具有至少约10％，优选10％-99％的同源性。

附图简述

图1显示8H9 scFv氨基酸序列(SEQ ID NO.7)和基因序列(有 义和互补，SEQ ID NOs.8-9)。互补决定区(CDR)以下面的顺序以方框 标记：CDR-1(HC，重链)，CDR-2(HC)，CDR-3(HC)，CDR-1(LC，轻链)， CDR-2(LC)，CDR-3(LC)。

图2显示8H9scFv的核苷酸和氨基酸序列(SEQ ID NOs.10-12)。 突变的8H9 scFv携带下列定点诱变(VH：K13E和VL：R18Q，R45Q，K103E， K107E)，从而将PI从6.4降至4.8，且净电荷从-1降到-9，这是减少非特 异的正常组织粘附的策略。

图3显示8H9蛋白质印迹的非-还原SDS-PAGE。

图4显示8H9亲合纯化(非-还原SDS-PAGE，蛋白质印迹)。

图5显示8H9亲合纯化(非-还原SDS-PAGE，银染色)。

图6显示由FACS分析的HLA-I(MHC I型)和B7H3蛋白在 K562细胞表面上的表达。

图7显示NK92细胞针对K562和HTB82细胞的细胞溶解活性 (关于细胞-介导的细胞溶解的铬释放测定的结果)。