[发明专利]无脊椎动物微RNA

权利要求书

1.一种非天然植物，具有对从所述植物摄取RNA的无脊椎动物害虫的抗性，其中

所述非天然植物包含其基因组中具有重组DNA构建体的转基因植物细胞，该重组DNA构建体在所述转基因植物细胞中转录成重组miRNA前体；且

所述重组miRNA前体包含RNA的单链，该RNA的单链折叠成无脊椎动物miRNA前体的二级结构并包含至少一个加工成成熟miRNA的茎环；且

所述成熟miRNA抑制所述无脊椎动物害虫的或与所述无脊椎动物害虫相关的共生体的至少一个目标基因的表达，从而赋予所述非天然植物对所述无脊椎动物害虫的抗性。

2.根据权利要求1的非天然植物，其中所述至少一个加工成成熟miRNA的茎环包含茎区域和环区域，其中

所述茎区域包含第一片段和第二片段，

所述第一片段包含用于使编码所述目标基因的信使RNA静默的至少19个连续核苷酸，

所述第二片段包含至少19个连续核苷酸，

所述环区域位于所述第一和第二片段之间，且

所述第一和第二片段杂交以形成部分双链RNA，

其中所述第一片段的至少一个核苷酸是未配对的。

3.根据权利要求3的非天然植物，其中所述使信使RNA静默的至少19个连续核苷酸与所述信使RNA中的一个等长度片段具有至少70％的互补性。

4.根据权利要求3的非天然植物，其中所述环区域包括所述无脊椎动物miRNA前体的原始环序列。

5.根据权利要求1的非天然植物，其中所述RNA的单链包含加工成成熟miRNA的单个茎环。

6.根据权利要求1的非天然植物，其中所述RNA的单链包含加工成成熟miRNA的多个茎环。

7.根据权利要求1的非天然植物，其中所述无脊椎动物害虫是选自昆虫、蛛形纲动物、线虫类、软体动物和环节动物的至少一种。

8.根据权利要求1的非天然植物，其中所述至少一个目标基因是(a)单目标基因或(b)多个目标基因。

9.根据权利要求1的非天然植物，其中所述至少一个目标基因是从所述无脊椎动物miRNA前体天然表达的无脊椎动物miRNA的内源靶标。

10.根据权利要求1的非天然植物，其中所述至少一个目标基因不是从所述无脊椎动物miRNA前体天然表达的无脊椎动物miRNA的内源靶标。

11.根据权利要求1的非天然植物，其中所述至少一个目标基因是与所述无脊椎动物害虫相关的共生体的目标基因。

12.根据权利要求1的非天然植物，其中

(a)所述非天然植物是玉米且所述无脊椎动物害虫是叶甲虫类；

(b)所述非天然植物是大豆且所述无脊椎动物害虫是大豆异皮线虫；

(c)所述非天然植物是葡萄且所述无脊椎动物害虫是葡萄根瘤蚜或玻璃翅神射手(琉璃叶蝉)；或

(d)所述非天然植物是苹果且所述无脊椎动物害虫是苹果绵蚜。

13.根据权利要求1的非天然植物，其中所述重组DNA构建体进一步包含一个或多个选自以下的元件：

(a)在植物细胞中发挥功能的启动子；

(b)转基因转录单元；

(c)基因抑制元件；和

(d)转录调节/转录物稳定元件。

14.根据权利要求1的非天然植物，其中所述非天然植物是转基因植物。

15.根据权利要求1的非天然植物，其中所述非天然植物进一步包含非转基因组织。

16.根据权利要求15的非天然植物，其中所述植物包含非转基因接穗和含有所述转基因植物细胞的砧木。

17.基因组中具有重组DNA构建体的非天然转基因植物细胞，该重组DNA构建体在所述非天然转基因植物细胞中转录成重组miRNA前体，其中所述重组miRNA前体包含RNA的单链，该RNA的单链折叠成无脊椎动物miRNA前体的二级结构并包含至少一个加工成成熟miRNA的茎环；且其中所述成熟miRNA抑制无脊椎动物的或与所述无脊椎动物相关的共生体的至少一个目标基因的表达。