[发明专利]用于生产基于酵母的疫苗的方法

说明书

相关申请

本申请要求在2008年2月2日递交的美国申请系列号No.60/899,281 的优先权，特此将其整体并入作为参考。

发明领域

本发明涉及在中性pH培养酵母培养物以改善酵母培养物的产率和某 些特征的方法。本发明还涉及通过这些方法产生的组合物。

发明背景

疫苗是卫生护理产业可利用的费效比最高的措施之一。然而对于多种 疾病而言依然急需研发安全有效的疫苗和佐剂，包括由于致病因子感染、 癌症、遗传缺陷所致的那些疾病及其他免疫系统紊乱。有关疫苗的出版物， 例如Rabinovich等，Science 265，1401-1404(1994)指出，仍然需要能够口服 给药以及仅需少次、优选在生命早期给药的安全热稳定的疫苗。还优选能 够保护个体对抗不止一种疾病的组合疫苗，以及不需要佐剂的疫苗和能够 激发粘膜免疫的疫苗。迄今为止，如果有的话，也只有极少的疫苗满足所 有这些标准。

亚单位疫苗的研发因为重组DNA技术而成为可能，但迄今为止一直 令人失望，因为它们仅呈现出有限的免疫原性。一个例子是最近几种HIV (人类免疫缺陷病毒)亚单位疫苗的临床测试已被终止，这不仅是因为这些 疫苗功效有限，而且还因为在一些情况下经免疫的个体在随后接触HIV时 表现出加剧的病程进展；例如参见Cohen，Science 264：1839(1994)和Cohen， Science 264：660(1994)。亚单位疫苗以及杀死的病毒和重组活病毒疫苗的 一个劣势在于虽然它们似乎刺激强体液免疫反应，但是不能激发保护性细 胞免疫。1994年国际艾滋病大会(International AIDS Conference)的主要结 论是，依然需要细胞毒性T细胞介导的反应来预防或减轻HIV感染性， 而这在迄今为止的临床疫苗中是一直缺乏的。另外，迄今为止所测试的 HIV疫苗不能在粘膜表面(最初HIV感染发生的位置)激发免疫。

此外，在美国批准使用的唯一佐剂是铝盐，即氢氧化铝和磷酸铝，两 者均不能刺激细胞介导的免疫。另外，铝盐制剂不能进行冷冻或冻干，且 这样的佐剂并非对所有抗原都有效。

酵母细胞已经用于亚单位蛋白疫苗的生产，包括前述HIV疫苗试验中 测试的一些。还曾在动物免疫之前对其饲喂酵母，试图以非特异性方式引 发免疫反应(即刺激吞噬作用以及补体和干扰素的产生)。这些结果模棱两 可，且这样的方案未产生保护性细胞免疫；例如参见Fattal-German等，Dev. Biol.Stand.77：115-120(1992)和Bizzini等，FEMS Microbiol.Immunol.2： 155-167(1990)。

除疫苗之外，许多基因和药物治疗也都需要有效的特异性递送运载体 以确保最大的可能益处。缺乏足够的递送运载体是基因治疗应用的主要拦 路虎，并且大幅限制了许多药物的治疗潜力。例如，最近的报道显示目前 正在临床上进行基因治疗应用检测的腺病毒载体会刺激不期望的免疫和炎 性反应，且似乎并不以期望的方式发生整合；例如参见Engelhardt等， Human Gene Therapy 5：1217-1229(1994)及其中引述的参考文献。

酵母疫苗技术的另一主要障碍为生产过程。多年来已在实验室进行了 酵母细胞培养，且已经确立了标准培养条件。例如参见Methods of Enzymology，194卷，Guthrie等编辑，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)(1990)。标准操作方案一般包括在以pH水平衡 量为酸性的培养基中培养酵母。然而，在酸性培养基中培养酵母可能导致 酵母呈现出对于使用酵母作为抗原携带载体用于免疫调节或疫苗制备目的 而言并非最佳的不同生物学特性。因此，需要培养酵母的方法，以便酵母 呈现出使之更佳地适用于作为抗原携带载体的特性。本文公开的发明部分 地基于这样的发现，即，虽然酵母能够在酸性培养基中生长，但酵母在酸 性培养基中生长时所呈现出的生物学特性不如酵母在中性pH水平的培养 基中生长时那样值得期望。

特此将本文引述的所有专利、专利申请和出版物的公开内容整体并入 作为参考用于一切目的。

发明概述