[发明专利]重组微生物

权利要求书

1.一种重组微生物，其通过将对所需的蛋白质或多肽进行编码的 基因转染到微生物中而获得，所述微生物通过如下方法获得：以遗传 方式构建成过度表达枯草杆菌(Bacillus subtilis)的secY基因，并使 选自芽孢形成相关基因中的一种或多种基因从基因组中缺失或灭活，

其中，所述微生物是枯草杆菌，

所述芽孢形成相关基因选自phrA、sigF和sigE基因。

2.一种重组微生物，其通过将对所需的蛋白质或多肽进行编码的 基因转染到微生物株中而获得，所述微生物株通过如下方法获得：将 在微生物中具有功能的转录起始控制区或转录起始控制区-核糖体结合 的位点导入至枯草杆菌的secY基因的基因组的上游，或者导入至含有 枯草杆菌的secY基因的基因组上的操纵子的先导基因的上游；或者所 述微生物株通过如下方法获得：导入一基因片段，并使选自芽孢形成 相关基因的一种或多种基因缺失或灭活，在所述基因片段中，在微生 物中具有功能的转录起始控制区或转录起始控制区-核糖体结合的位点 连接在枯草杆菌的secY基因的上游，

其中，所述微生物是枯草杆菌，

所述芽孢形成相关基因选自phrA、sigF和sigE基因。

3.根据权利要求2所述的重组微生物，其中所述在微生物中具有 功能的转录起始控制区或转录起始控制区-核糖体结合的位点来源于枯 草杆菌的spoVG基因。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的重组微生物，其中选自与基 因的转录、翻译和分泌有关的控制区的任何一个或多个区连接在对所 需的蛋白质或多肽进行编码的基因的上游，

其中，与基因的转录、翻译和分泌有关的控制区包括：含有启动 子和转录起始点的转录起始控制区、含核糖体结合位点和起始密码子 的翻译起始控制区、以及分泌信号肽区。

5.根据权利要求4所述的重组微生物，其中连接有所述转录起始 控制区、翻译起始控制区和分泌信号区这三个区。

6.根据权利要求4所述的重组微生物，其中所述分泌信号区来自 枯草杆菌的纤维素酶基因，并且所述转录起始控制区和所述翻译起始 控制区来自所述纤维素酶基因上游的大小为0.6-1kb的区。

7.根据权利要求4所述的重组微生物，其中所述转录起始控制区、 翻译起始控制区和分泌信号区这三个区形成由一定碱基序列构成的 DNA片段，其中所述一定碱基序列为由SEQ ID NO：5所示的碱基序列 的纤维素酶基因的1号碱基至659号碱基的碱基序列。

8.一种产生如权利要求1所述的重组微生物的方法，其包括：在 微生物中，

将在微生物中具有功能的转录起始控制区或转录起始控制区-核糖 体结合的位点，导入至枯草杆菌的secY基因的基因组的上游，或者导 入至含有枯草杆菌的secY基因的基因组上的操纵子的先导基因的上 游；或者导入一基因片段，在所述基因片段中，在微生物中具有功能 的转录起始控制区或转录起始控制区-核糖体结合的位点连接在枯草杆 菌的secY基因的上游；

使选自芽孢形成相关基因的一种或多种基因缺失或灭活；和

将对所需的蛋白质或多肽进行编码的基因转染到微生物株中，

所述芽孢形成相关基因选自phrA、sigF和sigE基因。

9.一种使用根据权利要求1-7中任意一项所述的重组微生物产生 所需的蛋白质或多肽的方法。