[发明专利]鉴别Lyn激酶激活剂的方法

说明书

发明领域

本发明涉及鉴别Lyn激酶激活剂的方法和与此相关的试剂盒。

发明背景

Lyn激酶是非受体酪氨酸蛋白激酶src家族的成员，该家族主要在B淋 巴样细胞和髓系细胞中表达。参见例如Briggs SD，Lerner EC，Smithgall TE： Affinity Of Src Family Kinase SH3 Domains For HIV Nef In Vitro Does Not Predict Kinase Activation By Nef In Vivo.Biochemistry 39：489-495(2000)，该 文献通过引用结合于此。Lyn参与从缺少固有酪氨酸激酶活性的细胞表面 受体开始的信号转导。Lyn激酶活性的激活对于由IL-6刺激的CD45+骨髓 瘤细胞的增殖是必需的。参见Ishikawa H，Tsuyama N，Abroun S，Liu S，Li FJ， Taniguchi O，Kawano MM：Requirements of src family kinase activity associated with CD45 for myeloma cell proliferation by interleukin-6.Blood 99： 2172-2178(2002)，该文献通过引用结合于此。Lyn和Fyn与糖蛋白VI的富 脯氨酸结构域的缔合调节细胞内信号转导。参见例如Suzuki-Inoue K， Tulasne D，Shen Y，Bori-Sanz T，Inoue O，Jung SM，Moroi M，Andrews RK， Berndt MC，Watson SP：Association of Fyn and Lyn with the proline-rich domain of glycoprotein VI regulates intracellular signaling.J.Biol.Chem.277： 21561-21566(2002)，该文献通过引用结合于此。Lyn/CD22/SHP-1途径在自 身免疫中很重要。参见例如Blasioli J，Goodnow CC：Lyn/CD22/SHP-1 and their importance in autoimmunity.Curr.Dir.Autoimmun.5：151-160(2002)，该 文献通过引用结合于此。

已表明，肥胖症、高脂血症和糖尿病在各种病症包括例如动脉粥样硬 化性心血管疾病(其目前占西方社会死亡率的相当比例)中起到病因性作 用。一种称作“X综合征”或“代谢综合征”的人类病症表现为葡萄糖代 谢缺陷(例如胰岛素抵抗)、血压升高(即高血压)和血脂失衡(即血脂障 碍)。参见例如Reaven，1993，Annu.Rev.Med.44：121-131。

目前可商购的用于调节Lyn激酶或控制葡萄糖水平升高的药物都不具 有调节血液中脂质、脂蛋白、胰岛素和葡萄糖水平的全面功用。因此，十 分需要具有一种或多种这样的功用的化合物。而且，十分需要开发更为安 全的有效降低血清胆固醇、增加HDL血清水平、预防冠心病和/或治疗现 有的疾病如动脉粥样硬化、肥胖症、糖尿病和受葡萄糖代谢和/或葡萄糖水 平升高影响的其它疾病的药物。因此，用于鉴别Lyn激酶激活剂的测定方 法是非常需要的。

发明概述

本发明提供鉴别Lyn激酶激活剂的方法，其包括：在Lyn激酶的存在 下预温育供试化合物；向所述Lyn激酶和供试化合物添加ATP和底物；温 育所述供试化合物、Lyn激酶、ATP和底物；以及测定所述底物的磷酸化 水平，借此所述底物的磷酸化水平增加指示所述供试化合物为Lyn激酶激 活剂。

在一些实施方案中，在Lyn激酶的存在下预温育所述供试化合物约5 分钟-约120分钟。在一些实施方案中，在Lyn激酶的存在下预温育所述供 试化合物约30分钟-约90分钟。在一些实施方案中，在Lyn激酶的存在下 预温育所述供试化合物约45分钟-约75分钟。在一些实施方案中，在Lyn 激酶的存在下预温育所述供试化合物约60分钟。在一些实施方案中，在 Lyn激酶的存在下预温育所述供试化合物20-40分钟。