[发明专利]使用含高浓度氨基酸的培养基的细胞培养方法

权利要求书

1、细胞的培养方法，其特征在于在通过培养产生所希望的蛋白质的细胞制造该蛋白质时，至少在细胞的增殖期开始时以后的一定时间内，培养液中的丝氨酸的浓度在1mM以上。

2、根据权利要求1所述的方法，其还至少在细胞的增殖期开始时以后的一定时间内，培养液中的酪氨酸的浓度在1mM以上，和/或半胱氨酸的浓度在起始培养基的浓度以上或0.4mM以上。

3、动物细胞培养用培养基，其含有1mM以上的丝氨酸或其盐。

4、权利要求3所述的动物细胞培养用培养基，其还至少含有1mM以上的酪氨酸、和/或0.4mM以上的半胱氨酸。

5、一种所希望的蛋白质的制造方法，其特征在于使用权利要求3或4所述的动物细胞培养用培养基，通过培养产生所希望的蛋白质的细胞制造该蛋白质。

6、细胞的培养方法，其特征在于在培养产生所希望的蛋白质的细胞制造该蛋白质时，至少在培养的细胞能够充分增殖时或产生的所希望的蛋白质能够充分产生的时间内的一部分或所有时间内培养液中丝氨酸的浓度在1mM以上。

7、根据权利要求6所述的方法，其还至少在培养的细胞能够充分增殖时或产生的所希望的蛋白质能够充分产生的时间内的一部分或所有时间内，培养液中酪氨酸的浓度在1mM以上，和/或半胱氨酸的浓度在起始培养基的浓度以上或0.4mM以上。

8、细胞的培养方法，其特征在于在通过培养产生所希望的蛋白质的细胞制造该蛋白质时，至少在细胞的对数增殖期的一部分或全部时间内，培养液中丝氨酸的浓度在1mM以上。

9、根据权利要求8所述的方法，其还至少在细胞的对数增殖期的一部分或全部时间内，培养液中的酪氨酸浓度在1mM以上，和/或半胱氨酸浓度在起始培养基的浓度以上或0.4mM以上。

10、根据权利要求8或9所述的方法，其至少在细胞的对数增殖期的一部分或全部时间内培养液中丝氨酸浓度在2mM以上。

11、细胞的培养方法，其特征在于在通过培养产生所希望的蛋白质的细胞制造该蛋白质时，至少在培养第3～10天的一部分和全部时间内，培养液中的丝氨酸浓度在1mM以上。

12、根据权利要求11所述的方法，其还至少在培养第3～10天的一部分和全部时间内，培养液中的酪氨酸浓度在1mM以上，和/或半胱氨酸的浓度在起始培养基的浓度以上或0.4mM以上。

13、根据权利要求11或12所述的方法，至少在培养第3～10天的一部分和全部时间内培养液中的丝氨酸的浓度在2mM以上。

14、根据权利要求1、2、5～13任一项所述的方法，其通过分批培养法(batch culture)、重复分批培养法(repeated batch culture)、流加培养法(fed-batch culture)、或重复流加培养法(repeatedfed-batch culture)、连续培养法(continuous culture)、灌流培养法(perfusion culture)培养细胞。

15、权利要求1、2、5～13任一项所述的方法，其通过流加培养法培养细胞。

16、权利要求15所述的方法，其通过逐次多次和连续流加向培养液提供丝氨酸和酪氨酸和/或半胱氨酸。

17、权利要求1、2、5～16任一项所述的方法，所述细胞导入了编码所希望的蛋白质的基因。

18、权利要求17所述的方法，所述所希望的蛋白质是抗体。

19、权利要求1、2、5～18任一项所述的方法，所述细胞是哺乳动物细胞。

20、权利要求19所述的方法，所述哺乳动物细胞是CHO细胞。

21、含有浓度为10mM～1000mM的丝氨酸的细胞培养用流加培养基。

22、含有浓度为20mM～500mM的丝氨酸的细胞培养用流加培养基。

23、根据权利要求21或22所述的流加培养基，其还添加了半胱氨酸和/或酪氨酸。