[发明专利]用于定量测定小而密LDL的试剂

说明书

技术领域

本发明涉及用于测定小而密脂蛋白(LDL)中胆固醇的试剂，这对于 动脉硬化的诊断是重要的。

背景技术

低密度脂蛋白(LDL)在血液中的胆固醇运输中起主要作用并且是动 脉硬化的危险因素。已知小而密的脂蛋白(小而密LDL(小颗粒低密度 脂蛋白))，其在LDL中粒度特别小，与标准LDL相比，其比重更高， 具有以高于标准LDL几倍的水平引发动脉硬化的能力。小而密LDL的 增加是动脉硬化的主要危险因素之一，因此在临床上对该小而密LDL 进行分级测定是很非常重要的。

用于小而密LDL的常规测量的方法的例子包括超速离心方法、电泳 方法、以及使用高效液相色谱的方法。然而，由于这些方法需要昂贵的 设备和大量的测量时间，因此并不方便。

一种利用自动分析仪测量小而密LDL的方法例子是以下方法(参见 日本专利公布(Kokai)号2003-28882A)，该方法涉及利用在离子强度 方面的差异，将小而密LDL混合并悬浮或溶解，然后利用在吸光度方面 的差异测量小而密LDL。然而，根据该方法，在吸光度方面差异是基于 浊度进行测量的，因此特异性和准确度不足。

此外，已知一种方法(参见WO2004/053500)，该方法涉及通过使 用分离剂的组合(其包括聚阴离子和二价阳离子以及适合于自动分析仪 的试剂)来测量小而密LDL中的胆固醇或甘油三酸酯。该方法能够比超 速离心方法或电泳方法更方便地测量小而密LDL中的脂质成分。此外， 该方法的特异性和准确度极好，但是该方法需要预处理试样并需要将小 而密LDL从除这种LDL之外的LDL中分离出来的步骤。

本发明公开

本发明要达到的目的

本发明的一个目的是提供一种用于无需预处理试样的分级测量小 而密LDL的试剂，其适用于迅速而方便的自动分析仪。

达到该目的的方法

作为追求该目的而集中研究的结果，本发明人发现，当利用胆固醇 酯酶和胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶测量含各种脂蛋白的试样中的胆 固醇时，酶和小而密LDL的反应速率与该相同的酶和除小而密LDL之 外的脂蛋白的反应速率相比能够被改变。这种改变是通过以特定浓度使 用特定表面活性剂来达到的，所以除小而密LDL之外的脂蛋白能够被导 向反应系统之外。当具有特定浓度的表面活性剂被用于自动分析仪的试 剂的第一步中时，与小而密LDL的酶反应速率被降低，并且小而密LDL 与酶之间的反应被延迟了。同时，上述具有特定浓度的特定表面活性剂 作用于除小而密LDL之外的脂蛋白，所以导致该脂蛋白与酶反应并因此 能够将其导向反应系统之外。本发明人此外还已发现酶与除小而密LDL 之外的脂蛋白的反应速率增加，同时胆固醇酯酶与小而密LDL的反应速 率被降低了，并且酶反应由于指定酶的浓度而被延迟了。通过在如上所 述第一步中将除小而密LDL之外的脂蛋白导向反应系统之外，然后在第 二步中使剩余的小而密LDL与酶反应，本发明人已经在测量小而密LDL 中的胆固醇方面取得了成功，因此本发明人已经完成了本发明。

本发明如下所述。

一种用于定量测定试样中小而密LDL中胆固醇的方法，该方法包括： 第一步：在胆固醇酯酶和0.05g/L-1.0g/L的表面活性剂(该表面活性 剂作用于除小而密LDL外的脂蛋白)的存在下消除试样中除小而密LDL 之外的脂蛋白；以及第二步：定量测定在第一步之后剩余的小而密LDL 中的胆固醇。

根据[1]所述的用于定量测定小而密LDL中胆固醇的方法，其中在第 一步中，作用于除小而密LDL之外的脂蛋白的表面活性剂是一种选自以 下的非离子型表面活性剂：聚氧化乙烯烷基醚、聚氧化乙烯烷基苯基醚、 聚氧化乙烯烷基胺和烷氧基化月桂醇；一种选自以下的阴离子型表面活 性剂：聚氧化乙烯烷基醚硫酸盐、烷基硫酸盐、酰胺醚硫酸盐、烷基 牛磺酸盐和磷酸盐型表面活性剂；一种选自以下的阳离子型表面活性 剂：烷基甲基铵盐、季铵盐和单线性烷基型表面活性剂或选自以下的两 性表面活性剂：月桂基甜菜碱、二甲基烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱型表面 活性剂、咪唑啉型表面活性剂，以及烷基二氨基乙基甘氨酸钠。

根据[1]或[2]所述的用于定量测定小而密LDL中胆固醇的方法，其中 在第一步中采用的胆固醇酯酶的浓度范围为0.6U/mL-3.0U/mL。