[发明专利]诱导棉花胚发生性愈伤组织的方法

权利要求书

1.一种提高棉花植物再生效率的方法，包括以下步骤：

(a)在非胚发生性愈伤组织诱导培养基上培养棉花植物组织以 产生愈伤组织；

(b)在胚发生性愈伤组织诱导和胚形成培养基上培养所述愈伤 组织以产生胚；

(c)在胚成熟培养基上培养所述胚以产生成熟的胚；

(d)在胚萌发培养基上培养所述成熟胚；和

(e)从所述成熟的胚获得再生的棉花植物；

其中所述方法进一步包括在发生愈伤组织诱导的步骤(a)中提高 乙烯并在发生胚发生和胚成熟的步骤(b-d)中没有提高的乙烯的情况 下培养棉花植物组织。

2.权利要求1所述的方法，其中所述棉花组织在包含硝酸钙和 硫酸钾的非胚发生性愈伤组织诱导培养基上培养；与MS培养基中 的盐相比，硝酸铵、氯化钙、硝酸钾、碘化钾和氯化钴的量降低； 且与MS培养基中的盐相比，硫酸铜和硫酸锰的量提高。

3.权利要求1所述的方法，其中所述棉花组织包含在步骤(b)或 步骤(c)之前被异源DNA序列转化的细胞。

4.权利要求3所述的方法，其中所述转化细胞在包含卡那霉素、 草甘膦或草铵膦的培养基上进行选择。

5.权利要求3所述的方法，进一步包括在转化之前在液体培养 基中预浸所述棉花组织至少1小时。

6.权利要求5所述的方法，其中所述液体培养基包含MSO葡 萄糖培养基的基础盐和碳水化合物成分。

7.权利要求5所述的方法，其中所述棉花组织是棉花胚轴或子 叶外植体。

8.权利要求1所述的方法，其中所述非胚发生性愈伤组织诱导 培养基包含WPSEL培养基的基础盐成分，所述WPSEL培养基的组 成如下：

成分 量/L LM木本植物基础盐 2.3g Gamborg’s B5维生素 2ml 2，4-D(1mg/ml) 0.1ml 激动素(0.5mg/ml) 1ml 葡萄糖 30g 植物凝胶 2.5g 羧苄青霉素 425mg 头孢噻肟 100mg pH 5.8 。