[发明专利]回收叶蛋白的新方法

权利要求书

1.从植物叶回收可溶性叶蛋白的方法，该方法自始至终在约0℃至约25℃的温度下进行，包括以下步骤：

(a)在缓冲溶液存在下，将含有可溶性蛋白的植物叶的细胞壁破碎，以使破碎的叶的物质和可溶性叶蛋白暴露于缓冲溶液中，并且使叶蛋白溶解在其中，其中缓冲溶液(i)浓度为0.025M-0.3M；(ii)以大于1∶1的缓冲液与叶的比存在；(iii)pH值与可溶性叶蛋白的等电点相差至少一个pH单位，并且与破碎的叶的物质的pH值相差在两个pH单位以内；(iv)具有在(iii)的pH值内有效的缓冲区域；以及(v)任选地包括螯合剂和/或还原剂，

(b)在可溶性叶蛋白保持溶解在缓冲溶液中的条件下，除去基本上所有的纤维素物质；

(c)在可溶性叶蛋白保持溶解在缓冲溶液中的条件下，除去大多数植物叶绿体物质；以及

(d)干燥缓冲溶液中溶解的叶蛋白。

2.权利要求1的方法，其中在步骤(a)中，叶的细胞壁通过将叶切碎，磨碎，碾碎或压碎，成浆，浸渍程序，机械压力，辊子或匀浆化破碎。

3.权利要求1的方法，其中在步骤(a)后，破碎的植物细胞壁在缓冲溶液中保持长达24小时。

4.权利要求3的方法，其中破碎的植物细胞壁在环境温度或低于环境温度的温度下保持在缓冲溶液中。

5.权利要求1的方法，其中缓冲溶液是适于蛋白提取的系统，其选自以下组合：磷酸氢二钠和磷酸二氢钾(Na₂HPO₄-KH₂PO₄)，磷酸二氢钾/氢氧化钠，氢氧化钠/柠檬酸，乙酸/乙酸铵，氢氧化钾/磷酸二氢钾，柠檬酸/磷酸氢二钠，磷酸二氢钾/磷酸氢二钾，邻苯二甲酸氢钾/氢氧化钠，碳酸钾/四硼酸钾/氢氧化钾/EDTA二钠二水合物，giordano缓冲液，乙酸钠三水合物/氯化钠，三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，EDTA/Tris/HCl，2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇/Tris，Tris/EDTA，氯化铵/氢氧化铵，HEPES/NaCl，咪唑，磷酸盐，N-吗啉基丙磺酸(MOPS)，N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(“TES”)，三乙醇胺，和N-三(羟甲基)-甲基-甘氨酸(“Tricine”)。

6.权利要求1的方法，其中螯合剂选自EDTA，EGTA，HEDTA，DTPA，NTA，柠檬酸钙，二乙酸钙，六偏磷酸钙，柠檬酸，葡糖酸，磷酸氢二钾，磷酸氢二钠，异丙基柠檬酸盐，磷酸二氢钙，一异丙基柠檬酸盐，柠檬酸钾，磷酸二氢钠，柠檬酸钠，葡糖酸钠，六偏磷酸钠，偏磷酸钠，磷酸钠，焦磷酸钠，三聚磷酸钠，硬脂酰柠檬酸盐，焦磷酸四钠，乙二胺四乙酸钙二钠，葡萄糖酸-δ-内酯，葡萄糖酸钾等，以及其类似物，同系物和衍生物。

7.权利要求1的方法，其中还原剂选自2-巯基乙醇，2-巯基乙胺-HCL，半胱氨酸-HCL，埃尔曼试剂，BME，DTT，谷胱甘肽，半胱氨酸，三(2-羧乙基)膦盐酸盐，TCEP二硫化物，N-乙基马来酰亚胺，TCEP-HCL，亚铁离子，氢化铝锂(LiAlH₄)，初生态氢，钠汞齐，硼氢化钠(NaBH₄)，亚锡离子，亚硫酸盐化合物，肼，锌汞齐(Zn(Hg))，二异丁基氢化铝，林德拉催化剂，草酸(C₂H₂O₄)，二硫赤藓糖醇，巯基乙酸盐，谷胱甘肽，半胱氨酸，抗坏血酸盐，以及其类似物，同系物和衍生物。

8.权利要求1的方法，其中在步骤(b)中，纤维素物质用螺旋压力机，纤维过滤器，飞轮式螺旋压力机，搅拌器，机械压力机，机械脱水装置或破碎机去除。

9.权利要求1的方法，其中在步骤(c)中，叶绿体物质用离心机或真空过滤器去除。

10.权利要求1的方法，其中在步骤(d)中，干燥通过喷雾干燥，真空干燥或冷冻干燥进行。