[发明专利]作为细胞内Icrac活性基础的蛋白质的功能鉴定有效
申请号: | 200880017095.0 | 申请日: | 2008-03-21 |
公开(公告)号: | CN101730846A | 公开(公告)日: | 2010-06-09 |
发明(设计)人: | 莱因霍尔德·彭纳;安德烈亚·弗莱格 | 申请(专利权)人: | 皇后医学中心 |
主分类号: | G01N33/50 | 分类号: | G01N33/50 |
代理公司: | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人: | 罗天乐 |
地址: | 美国夏*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 作为 细胞内 icrac 活性 基础 蛋白质 功能 鉴定 | ||
1.一种用于确定CRACM3对细胞的Icrac活性的贡献的测定法,所述测定 法包括(a)在≥50μM的2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)浓度测量所述细胞 的Icrac活性,其中所述Icrac活性的增强表明CRACM3对所述Icrac活性有 贡献。
2.权利要求1的测定法,还包括(b)在≤5μM2-APB的浓度和≥10μM2-APB 的浓度测量所述细胞的Icrac活性,其中Icrac电流在≤5μM2-APB的增强以 及在≥10μM2-APB存在下的抑制表明CRACM1对所述Icrac活性有贡献。
3.权利要求2的测定法,还包括(c)在50μM2-APB浓度测量所述细胞的 Icrac活性,其中CRACM2电流幅值40%至50%的减少表明CRACM2对所 述Icrac的贡献。
4.权利要求3的测定法,其中所述步骤(a)的对所述Icrac活性的测量选自下 组:测量Icrac失活动力学、Icrac激活动力学、以及所述细胞的钙内流;且 所述步骤(b)的对所述Icrac活性的测量选自下组:测量Icrac失活动力学、Icrac 激活动力学、以及所述细胞的Icrac钙内流;且所述步骤(c)的对所述Icrac 活性的测量选自下组:测量Icrac失活动力学、Icrac激活动力学、以及所述 细胞的Icrac钙内流。
5.权利要求1,2或3的测定法,其中所述细胞是稳定表达STIM1并瞬时过 表达所述CRACM3的HEK293细胞。
6.一种用于确定CRACM3对细胞的Icrac活性的贡献的测定法,所述测定 法包括(a)在≥50μM的2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)浓度测量所述细胞 的Icrac电流,其中所述Icrac电流的增强表明CRACM3对所述Icrac活性有 贡献。
7.权利要求6的测定法,还包括(b)在≤5μM2-APB的浓度和≥10μM2-APB 的浓度测量所述细胞的Icrac活性,其中Icrac电流在≤5μM2-APB的增强以 及在≥10μM2-APB存在下的抑制表明CRACM1对所述Icrac活性有贡献。
8.权利要求7的测定法,还包括(c)在50μM2-APB浓度测量所述细胞的 Icrac活性,其中CRACM2电流幅值40%至50%的减少表明CRACM2对所 述Icrac的贡献。
9.权利要求8的测定法,其中所述步骤(a)的对所述细胞的Icrac活性的所述 测量选自下组:测量Icrac失活动力学、Icrac激活动力学、以及所述细胞的 钙内流;且所述步骤(b)的对所述细胞的Icrac活性的所述测量选自下组:测 量Icrac失活动力学、Icrac激活动力学、以及所述细胞的Icrac钙内流。
10.权利要求6,7或8中任一项的测定法,其中所述细胞是稳定表达STIM1 并瞬时过表达所述CRACM3的HEK293细胞。
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