[发明专利]禽类EBX细胞中的重组蛋白生产

权利要求书

1、一种转染至少一种表达载体的禽类细胞，所述表达载体包含至少一 种表达盒，所述表达盒包含编码目的重组蛋白的核酸序列，该序列通过操作连接 至能影响所述蛋白在所述细胞中表达的启动子序列上。

2、根据权利要求1所述的细胞，其中表达载体进一步包含至少一种表 达盒，所述表达盒包含至少一种编码选择性标记的核酸序列，所述核酸序列通过 操作连接至能影响所述选择性标记在宿主细胞中表达的启动子序列上。

3、根据权利要求1和2所述的细胞，其中选择性标记选自谷氨酰胺合 酶、黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶、嘌呤霉素、潮霉素B、新霉素基因或二氢叶酸 还原酶(DHFR)。

4、根据权利要求3所述的细胞，其中启动子序列选自巨细胞病毒(CMV) 启动子、猴病毒40(SV40)早期启动子、单纯疱疹病毒(HSV)胸腺嘧啶脱氧核 苷激酶启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、鼠磷酸甘油酸激酶启动子、eIF4α 启动子、嵌合EF1α/HTLV启动子、CAG启动子或β-肌动蛋白启动子。

5、根据权利要求1和4所述的细胞，其中所述表达盒进一步包含一种 或多种调控元件或调节性序列，其选自转录起始序列、增强子序列、内含子序列、 多腺苷酸化序列、终止序列或染色质隔离元件。

6、根据权利要求5所述的细胞，其中染色质隔离元件选自边界元件 (BE)、基质结合区(MAR)、基因座调控区(LCR)或通用染色质开放元件(UCOE)。

7、根据权利要求1至6所述的细胞，其中所述表达载体至少包含：

-第一表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°1的CMV 启动子序列、内含子序列、编码目的重组蛋白的cDNA序列、多腺苷酸化 序列；和

-第二表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SV40启动子、新 霉素基因、多腺苷酸化序列。

8、根据权利要求1至6所述的细胞，其中所述表达载体至少包含：

-第一表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°2的嵌 合EF1α/HTLV启动子序列、内含子序列、编码目的重组蛋白的cDNA序列、 多腺苷酸化序列；和

-第二表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SV40启动子、新 霉素基因、多腺苷酸化序列。

9、根据权利要求1至6所述的细胞，其中所述表达载体至少包含下列 顺序的：

-第一表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°1的CMV 启动子、内含子序列、编码抗体的重链或其片段的cDNA序列、多腺苷酸 化序列；

-第二表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°1的CMV 启动子、内含子序列、编码抗体的轻链或其片段的cDNA序列、多腺苷酸 化序列；

-第三表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SV40启动子、新 霉素基因、多腺苷酸化序列。

10、根据权利要求1至6所述的细胞，其中所述表达载体至少包含下 列顺序的：

-第一表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°2的嵌 合EF1α/HTLV启动子、内含子序列、编码抗体重链或其片段的cDNA序列、 多腺苷酸化序列；

-第二表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SEQ ID N°2的嵌 合EF1α/HTLV启动子、内含子序列、编码抗体轻链或其片段的cDNA序列、 多腺苷酸化序列；

-第三表达盒，其包含下列顺序的下列DNA序列：SV40启动子、新 霉素基因、多腺苷酸化序列。

11、根据权利要求1至10所述的细胞，其中细胞进一步包含表达载体， 所述表达载体至少包含表达盒，所述表达盒包含编码抗-细胞凋亡蛋白的DNA序 列，所述DNA序列通过操作连接至能影响所述抗细胞凋亡蛋白在细胞中表达的启 动子序列上。

12、根据权利要求11所述的细胞，其中抗细胞凋亡蛋白是鸡NR13蛋 白。