[发明专利]用于体内递送至哺乳动物细胞的、包含无质粒的功能性核酸的、源自细菌的完整小细胞

权利要求书

1.一种组合物，所述组合物包括：

(a)多个完整的、源自细菌的无核形式的小细胞，其中所述多个完整的、 源自细菌的小细胞中的每个小细胞包含调节性RNA，和

(b)用于小细胞的药学上可接受的载体，

其中：(1)所述小细胞不含用于所述调节性RNA的原位表达的构建体， (2)所述调节性RNA通过与所述小细胞在没有所述构建体的条件下共培养 而被直接包裹进所述小细胞内，(3)所述调节性RNA选自：siRNA、 miRNA和shRNA，并且(4)所述多个完整的、源自细菌的无核形式的小细 胞含有治疗上有效量的所述调节性RNA。

2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定编码介导抗药 性、抗凋亡性或瘤生成的蛋白质的RNA转录体。

3.如权利要求1所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定P-糖蛋白、MDR- 2或MDR-3的转录体。

4.如权利要求1所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定MRP2、BCR- ABL、介导STI-571耐药性的蛋白、肺耐药相关蛋白LRP、环氧酶-2、核因子 κ、XRCC1、ERCC1、GSTP1、突变的β-微管蛋白或生长因子的转录体。

5.如权利要求1所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定Bcl-2、Bcl-XL、 A1/Bfl1、黏着斑激酶或p53蛋白的转录体。

6.如权利要求1所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定β-联蛋白、PKC- α、C-RAF、K-Ras、DP97Dead框RNA解旋酶、cdk1、DNMT1、FLIP、C- Sfc、53BPI、聚梳家族蛋白EZH2、ErbB1、HPV-16E5和E7、Fortilin& MCI1P、KSP、DIP13α、MBD2、p21、KLF4、tpt/TCTP、SPK1&SPK2、 P300、PLK1、Trp53、Ras、ErbB1、VEGF或BAG-1的转录体。

7.如权利要求1所述的组合物，其进一步包含药物。

8.如权利要求7所述的组合物，其中，所述调节性RNA靶定编码介导对所述 药物的耐药性的蛋白质的转录体。

9.如权利要求8所述的组合物，其中，所述药物被包裹在完整的、源自细菌 的无核形式的小细胞内。

10.如权利要求9所述的组合物，其中，所述调节性RNA和所述药物被包裹在 相同的小细胞内。

11.如权利要求1所述的组合物，其进一步包含双特异性配体。

12.如权利要求11所述的组合物，其中，所述双特异性配体包含携带对小细 胞表面结构特异性的第一个臂和携带对非噬菌性哺乳动物细胞表面受体特异 性的第二个臂。

13.如权利要求12所述的组合物，其中，所述哺乳动物细胞表面受体能够激 活所述小细胞的受体介导的内吞作用。

14.如权利要求11所述的组合物，其中，所述双特异性配体包含抗体或抗体 片段。

15.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中每10⁹个小细胞含有约1 个污染性亲代细菌细胞或者更少。

16.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中每10¹⁰个小细胞含有约1 个污染性亲代细菌细胞或者更少。

17.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物中每10¹¹个小细胞含有个 小细胞含有约1个污染性亲代细菌细胞或者更少。

18.如权利要求1所述的组合物，其作为药剂使用。

19.如权利要求18所述的组合物，其中，所述调节性RNA是shRNA。

20.如权利要求18所述的组合物，其中，所述调节性RNA是siRNA。