[发明专利]扩增甲基化核酸或非甲基化核酸的方法有效
| 申请号： | 200880018223.3 | 申请日： | 2008-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN101796185A | 公开（公告）日： | 2010-08-04 |
| 发明（设计）人： | 永坂岳司;松原长秀;屉本博美;田中纪章 | 申请（专利权）人： | 拜奥-迪克萨姆合同会社 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 蒋亭;苗堃 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 甲基化 核酸 方法 | ||
1.一种试剂盒，其特征在于，含有：
1)由第1引物、第2引物、以及第3引物构成的引物组，其中，
第1引物为不区分非甲基化核酸和甲基化核酸的引物，
第2引物为区分非甲基化核酸和甲基化核酸、且具有与第1引物实 质相同的引物区域的引物，以及
第3引物为不区分甲基化核酸和非甲基化核酸、而具有与第1引物 或第2引物成对地扩增核酸的功能的引物；
该引物组被用于通过聚合酶链反应(PCR)来扩增含CpG核酸， 所述含CpG核酸是通过使生物学试样与修饰非甲基化胞嘧啶的试剂接 触而能够存在于被处理的生物学试样中的，
所述修饰非甲基化胞嘧啶的试剂将能够存在于生物学试样中的含 CpG核酸的非甲基化胞嘧啶转换为尿嘧啶；
2)限制酶，所述限制酶识别扩增片段的序列中除引物区域以外的 序列中存在的CG或TG。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，在第1引物的序列中含 有至少1个CpG部位，并且与该CpG部位的胞嘧啶对应的位置的碱基， 被混合碱基Y和/或混合碱基R和/或肌苷酸I取代。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，在第2引物的序列 中含有至少2个CpG部位，并且，该CpG部位在甲基化核酸的序列或 非甲基化核酸的序列中特异性存在。
4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，第1引物和第2引 物的浓度比为10：1～1：1。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中，第1引物和第2引物的 浓度比为10：1～1：1。
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