[发明专利]基于肉毒毒素的神经毒成分供应温度-稳定性肌肉松弛剂的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素的神经毒成分的重组溶液，其至少呈现下述特性中的一种，优选呈现从a)到d)的全部特性：

a)在高于+20℃的贮存温度下稳定；

b)在防腐剂和/或镇痛剂的存在下稳定；

c)耐受“冷冻和解冻”-循环；

d)在不同材质的容器中贮存稳定。

背景技术

肉毒毒素由细菌梭状芽孢杆菌产生。肉毒毒素有七种抗原不同的血清型，即A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。肉毒毒素通常以复合物，即负责肉毒毒素毒性的亚单元(即所称的“神经毒成分”)与其他细菌蛋白复合在一起形成的毒素复合物的形式，从裂解的梭状芽孢杆菌培养物中释放出来。该复合物的分子量从约300,000Da至约900,000Da不等。复合蛋白为，例如，各种血凝素。这种毒素复合物的蛋白本身没有毒性，但被认为能为神经毒成分提供稳定性，并能导致肉毒杆菌口服中毒。与毒素复合物不同，神经毒成分以其分离和提纯形式，即不含任何复合梭菌蛋白的形式存在，其为不稳定酸并且对胃肠道中的侵蚀性环境不耐受。

肉毒毒素复合物的神经毒成分最初形成为单链多肽，在血清型A的情况下分子量约为150kDa。在另一种血清型中，观察到神经毒成分的分子量根据细菌的来源在约145kDa和170kDa间变化。在血清型A的情况下，例如，多肽的酶解加工产生了一种以双链多肽形式存在的活性多肽，该双链多肽由通过二硫键连接的重链和轻链组成。在人体中，重链介导内毒毒素与突触前的胆碱能神经末梢相结合并将毒素内转进入细胞内。轻链被认为具有毒性效应，起锌-肽链内切酶的作用并切割负责膜融合的特异性蛋白(SNARE复合物)(参见例如Montecucco C1 Shiavo G.，Rosetto O：The mechanism of action oftetanus and Botulinum neurotoxins.Arch Toxicol.1996；18(Suppl.)：342-354))。

通过干扰细胞内的膜融合过程，肉毒毒素阻止乙酰胆碱释放进入突触间隙。肉毒毒素在神经-肌肉接头处的总效应是阻断神经-肌肉间的传导，并在实际上，使肌肉去神经。肉毒毒素对其他周边胆碱能神经突触也有活性，造成流涎或出汗减少。

本发明中通篇使用的术语“肉毒毒素”或“肉毒毒素类”，不仅指不含任何其他梭菌蛋白的神经毒成分，也指“肉毒毒素复合物”：当毒素复合物与神经毒成分不必或不要求有区别时，在本发明中使用术语“肉毒毒素”。复合物通常含有其他的，所谓的“无毒蛋白”，我们将称之为“复合蛋白”或“细菌蛋白”。

尽管有毒性作用，肉毒毒素复合物已被用作许多疾病的治疗药物。1989年A型肉毒毒素在美国获准可供人类使用以治疗斜视、眼睑痉挛以及其他疾病。A型肉毒毒素蛋白复合物可市购获得，例如，以商标名BOTOX(Allergan Inc.)或以商标名DYSPORT(Ipsen Ltd)。用于治疗应用的复合物可直接注入需治疗的肌肉。在生理pH值下，神经毒成分从蛋白复合物中释放出来并产生所需的药效。

包含A型肉毒毒素的神经毒成分的药物组合物可从德国MerzPharmaceuticals GmbH以商标市购获得。A型和B型肉毒毒素的神经毒成分的制备描述于，例如，国际专利申请WO 00/74703和WO 2006/133818中。

关于基于肉毒毒素的组合物和药物剂量，以及基于肉毒毒素的神经毒成分的药物组合物、剂量和给药频率，可参阅PCT/EP2007/005754。

除了上述功能，据推测复合蛋白还能保护肉毒毒素的神经毒成分免受严酷的环境条件的影响，因为神经毒成分对降解和/或失活高度敏感，特别是当经受短期温度应力时，例如在温暖到炎热的气候或通常在夏季期间，即温度高于20℃时的贮存和/或运输。

为此，在过去一般会采取极为谨慎的措施以防止基于肉毒毒素，特别是基于肉毒毒素的神经毒成分的药物的温度达到+4℃以上，例如接近20℃。大多数情况下，将装有含有肉毒毒素的固态冻干物或其重组溶液的药瓶在冰上或至少在冰箱(约+4℃)中于约-20℃冷冻贮存(冻干)。这种必需的冷却会导致在供应药物时产生额外的费用。

此外，在本发明之前有人认为，包括肉毒毒素的神经毒成分的重组溶液对于不同的贮存或运输条件甚至更不稳定。另外还认为，重组溶液的冷冻和解冻将导致蛋白迅速降解和失活。因此，医师建议仅在给药前对蛋白-冻干物进行重组和/或将其严格贮存于上述概括的低温下。