[发明专利]核酸酶和复合体及其使用方法

权利要求书

1.一种用于检测至少一个靶的存在的方法，其包括

(a)提供至少第一核酸复合体的至少两个或多个寡核苷酸组分和至少 两个底物，其中至少第一寡核苷酸组分和第二寡核苷酸组分只在靶存在下 自装配形成包含具有连接酶活性的催化上有活性的多组分核酸酶(MNA 连接酶)的至少第一核酸酶，其中所述第一寡核苷酸组分和所述第二寡核 苷酸组分各自都包含能缔合形成所述MNA连接酶的完整催化核心的部分 催化核心，

(b)使所述两个或多个寡核苷酸组分和至少两个底物与推测含有所述 至少一个靶的样品在允许如下的条件下接触：

(1)所述至少一个催化上有活性的MNA连接酶的自装配，和

(2)所述至少一个MNA连接酶的催化活性；并

(c)确定所述至少一个MNA连接酶的催化活性的存在，其中所述催化 活性的存在指示所述至少一个靶的存在。

2.一种用于检测靶的方法，其包括

a)提供包含需要与所述靶缔合以促进形成第一核酸酶的组分的第一 核酸复合体，其中所述第一核酸复合体还包含至少一个底物，并

b)提供能与第一核酸酶催化的连接或切割反应产物缔合的第二核酸 复合体的至少一个组分

并形成能作为第二核酸酶起作用的第二核酸复合体

其中所述第一核酸酶催化的连接或切割反应产物与第二核酸复合体 的组分能够形成能作为第二核酸酶起作用的第二核酸复合体

其中所述核酸酶的至少一个具有连接酶活性，并且所述核酸酶的至少 一个是多组分核酸酶(MNA酶)，其中所述MNA酶包含第一寡核苷酸组 分和第二寡核苷酸组分，所述第一寡核苷酸组分和第二寡核苷酸组分各自 都包含能缔合形成所述MNA酶的完整催化核心的部分催化核心，其中所 述方法包括：

i)使推测含有靶的样品与所述第一核酸复合体接触，其中所述靶 与所述第一核酸复合体缔合以促进形成所述第一核酸酶，并

ii)使第一核酸酶催化的连接或切割反应产物与所述第二核酸复合 体的至少一个组分接触，因此允许作为所述第二核酸酶起作用的第二核酸 复合体的形成，并且

其中(i)所述第一核酸酶的活性或(ii)所述第一和第二核酸酶两者 的活性指示所述靶的存在。

3.如权利要求2所述的方法，其还包括

提供能与所述第一或第二核酸酶或两者催化的反应产物缔合的第三 核酸复合体的至少一个组分

并形成能作为第三核酸酶起作用的第三核酸复合体，其中所述方法包 括

使所述第一或第二核酸酶或两者催化的反应产物与所述第三核酸复 合体的至少一个组分接触，因此允许作为所述第三核酸酶起作用的第三核 酸复合体的形成，并且

其中所述第一、第二或第三核酸酶或其任意组合的活性指示所述靶的 存在。

4.如权利要求3所述的方法，其还包括

提供能与所述第一、第二、或第三核酸酶的至少一个的产物缔合的至 少一个其他核酸复合体的至少一个组分

并形成能作为至少一个其他核酸酶起作用的至少一个其他核酸复合 体，其中所述方法包括

使所述第一、第二或第三核酸酶催化的反应产物与所述至少一个其他 核酸复合体的至少一个组分接触，因此允许作为所述至少一个其他核酸酶 起作用的至少一个其他核酸复合体的形成，并且

其中所述第一、第二、第三或至少一个其他核酸酶或其任意组合的活 性指示所述靶的存在。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述核酸酶的至少一个具 有切割活性。

6.如权利要求1-4任一项所述的方法，其中至少所述第二核酸酶具有 连接酶活性。

7.如权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述第一核酸酶是多组分 核酸酶(MNA酶)。

8.如权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述核酸酶的至少一个是 DNA核酶。