[发明专利]谷胱甘肽及γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法

权利要求书

1.一种谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的制造方法，其中包括：在 培养基中培养细菌，在该培养基中生成并累积谷胱甘肽或γ-谷氨酰半 胱氨酸，以及从培养物中收集谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸，

所述细菌中以下[1]所述的具有将细胞内的谷胱甘肽转运到细胞外 的活性(以下称为谷胱甘肽转运活性)的蛋白质的活性、以及参与谷胱甘 肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的生物合成的蛋白质的活性高于亲本株，所述 参与谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸的生物合成的蛋白质为γ-谷氨酰半 胱氨酸合成酶(GSHI)和/或谷胱甘肽合成酶(GSHII)，

所述细菌是使用编码GSHI和/或GSHII的DNA对亲本株进行转 化而得到的细菌、或者是通过改变亲本株的染色体DNA上存在的编码 GSHI和/或GSHII的基因而得到的、i)GSHI和/或GSHII的比活性高于 亲本株的细菌、或ii)GSHI和/或GSHII的产量高于亲本株的细菌，并 且

所述细菌是使用编码[1]所述的蛋白质的DNA对亲本株进行转化 而得到的细菌、或者是通过改变亲本株的染色体DNA上存在的编码[1] 所述的蛋白质的基因而得到的、i)[1]所述的蛋白质的比活性高于亲本 株的细菌、或ii)[1]所述的蛋白质的产量高于亲本株的细菌，

[1]由序列号3所示的氨基酸序列构成的蛋白质。

2.如权利要求1所述的制造方法，其中，所述细菌是使用编码 GSHI和/或GSHII的DNA对亲本株进行转化而得到的细菌、或者是通 过改变亲本株的染色体DNA上存在的编码GSHI和/或GSHII的基因而 得到的、i)GSHI和/或GSHII的比活性高于亲本株的细菌、或ii)GSHI 和/或GSHII的产量高于亲本株的细菌，并且

所述细菌是使用以下[1]所述的DNA对亲本株进行转化而得到的 细菌，

[1]由序列号28所示的碱基序列中的编码区的碱基序列构成的 DNA。

3.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，GSHI及GSHII为 以下[1]所述的蛋白质，

[1]由序列号47或48所示的氨基酸序列构成的蛋白质。

4.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，编码GSHI及GSHII 的DNA为以下[1]所述的DNA，

[1]编码权利要求3的[1]所述的蛋白质的DNA。

5.如权利要求4所述的制造方法，其中，编码GSHI及GSHII的 DNA为以下[1]或[2]所述的DNA，

[1]由序列号49或50所示的碱基序列构成的DNA；

[2]由序列号49或50所示的碱基序列中的编码区的碱基序列构成 的DNA。

6.如权利要求1所述的制造方法，其中，细菌是具有谷胱甘肽或 γ-谷氨酰半胱氨酸分解活性的蛋白质的活性低于亲本株或丧失的细菌， 所述具有谷胱甘肽或γ-谷氨酰半胱氨酸分解活性的蛋白质是γ-谷氨酰 转肽酶。

7.如权利要求6所述的制造方法，其中，γ-谷氨酰转肽酶为以下 [1]所述的蛋白质，

[1]由序列号51所示的氨基酸序列构成的蛋白质。

8.如权利要求6所述的制造方法，其中，具有谷胱甘肽或γ-谷氨 酰半胱氨酸分解活性的蛋白质的活性低于亲本株或丧失的细菌是具有 编码γ-谷氨酰转肽酶的基因发生缺陷的染色体DNA的细菌。

9.如权利要求8所述的制造方法，其中，编码γ-谷氨酰转肽酶的 基因为以下[1]所述的DNA，

[1]编码权利要求7的[1]所述的蛋白质的DNA。

10.如权利要求9所述的制造方法，其中，编码γ-谷氨酰转肽酶 的基因为以下[1]或[2]所述的DNA，

[1]由序列号52所示的碱基序列构成的DNA；

[2]由序列号52所示的碱基序列中的编码区的碱基序列构成的 DNA。