[发明专利]红细胞携带的抗原以及抗红细胞抗体的检测

说明书

本发明利用了红细胞上抗原性分子的存在，来鉴定由红细胞和其它细胞群二者携带的抗原性分子。

如今，输血是静脉内供给从供血者获得的血红细胞浓缩物(血细胞浓缩物)制剂。在输血时，主要的风险与抗体及其红细胞抗原在接受者(被输血的个体)体内再结合的可能性有关。事实上，在红细胞、也被称为血红细胞的表面，存在有能够被免疫系统识别并能够引发免疫应答、使血红细胞溶血的膜抗原，特别是血型(或系统)抗原。这种免疫反应的结果，其范围可以从没有临床征兆的无效输血，到轻微临床反应(焦虑、颤抖)，严重临床反应(休克、血红蛋白尿(haemoglobinurea)、肾机能不全)或导致死亡的剧烈临床反应(休克、弥散性静脉内溶血)。

如果接受者不具有任何针对供体红细胞抗原的循环系统抗体，则供体的血红细胞被称为是与接受者的血液相容的。

除了血型抗原之外，在法国人群中，已经在15％的个体中检测到红细胞上存在的HLA抗原决定簇(de Villartay等，Tissue Antigens，1985，26(1)：12-9)。尽管红细胞上HLA抗原决定簇的这种量与其它细胞类型相比较低，但就输血风险来说仍是重要的(Everett等，Transplantation，1987，vol.44，no.1，pp.123-129)。

本发明人最初关注于输血风险，随后意识到，除了血型抗原分子之外，任何抗原性分子都可以利用它们在红细胞上的偶然出现，容易地被检测到。

发明内容

本发明提供了用于鉴定个体的红细胞携带的多种抗原性分子，和/或用于鉴定生物样品中多个针对红细胞携带的抗原性分子的抗体的体外方法，所述由红细胞携带的抗原性分子由红细胞和至少一种其它细胞群二者都携带的、血型分子之外的抗原性分子组成，所述方法包括：

a)通过下列步骤鉴定个体的红细胞携带的多种抗原性分子

(i)在允许红细胞与抗体结合并且不产生凝集的条件下，将所述含有红细胞的样品，在单一测试容器或在几个分离的测试容器中，与多组可辨别的珠子相接触，每组可辨别的珠子带有给定的、特异性针对红细胞携带的抗原性分子的抗体，抗体在一组珠子与另一组珠子之间不同，所述红细胞在与所述的多组珠子进行接触之前或之后被标记，

(ii)除去不与所述抗体结合的红细胞，以及

(iii)鉴定与标记的红细胞结合的珠子组，从而鉴定到由所检测的红细胞携带的抗原；

和/或

b)通过下述步骤鉴定生物样品中针对红细胞携带的抗原性分子的多种抗体，

(iv)在允许样品中存在的抗体或活化的血清补体级份与红细胞或红细胞膜片段结合，并且不产生凝集的条件下，将所述样品，在单一测试容器或在几个分离的测试容器中，与多组可辨别的珠子相接触，每组可辨别的珠子携带有表型已知的(1)红细胞或(2)红细胞膜片段，所述已知表型在一组珠子与另一组珠子之间不同，

(v)除去不与所述红细胞或所述红细胞膜片段结合的抗体或活化的血清补体级份，

(vi)对结合的抗体和/或结合的活化血清补体级份进行标记，以及

(vii)鉴定与标记的抗体或标记的活化血清补体级份结合的珠子组，从而鉴定存在的、针对红细胞携带的抗原性分子的抗体。

本发明还提供了一组用于执行这种方法的反应物，包含可辨别的珠子组，每个珠子带有至少一种可以被检测的具体物理参数，并且珠子属于至少两种不同的组，一组带有特异性针对红细胞携带的抗原性分子的捕获抗体，另一组携带(1)红细胞或(2)红细胞膜片段。

发明详述

定义：

在本说明书中，术语“红细胞(erythrocyte)”或“血红细胞(redblood cell)”没有差别，用于表示同样的血细胞。

术语“多重”是指在单一容器中，使用单一信号读取系统，对单一样品的几种不同抗原-抗体类型的反应同时进行分析。

术语“单式”是指抗原-抗体类型的反应在几个独立的容器中进行分析。但是，优选情况下，分析同时进行，并优选使用单一信号读取系统。