[发明专利]△9延伸酶及其在制备多不饱和脂肪酸中的用途

权利要求书

1.包含分离的多核苷酸的微生物宿主细胞，所述分离的多核苷酸包含：

(a)编码具有Δ9延伸酶活性的多肽的核苷酸序列，其中基于ClustalV比对方法在与SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14中示出的氨基酸序列进行比较时，所述多肽具有至少80％的氨基酸同一性；

(b)编码具有Δ9延伸酶活性的多肽的核苷酸序列，其中基于BLASTN比对方法在与SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：26中示出的核苷酸序列进行比较时，所述核苷酸序列具有至少80％的序列同一性；

(c)编码具有Δ9延伸酶活性的多肽的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列在严格条件下与SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：26中示出的核苷酸序列杂交；或

(d)(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的互补序列，其中所述互补序列与所述核苷酸序列由相同数目的核苷酸组成并且100％互补。

2.权利要求1的微生物宿主细胞，其中所述分离的多核苷酸编码SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14中示出的氨基酸序列。

3.权利要求1的微生物宿主细胞，其中所述微生物宿主细胞选自酵母、藻类、细菌、类眼虫、原生藻菌和真菌。

4.权利要求3的微生物宿主细胞，其中所述细胞是被孢霉属物种的真菌。

5.权利要求3的微生物宿主细胞，其中所述细胞是选自下列的原生藻菌：破囊壶菌属物种和裂殖壶菌属物种。

6.权利要求3的微生物宿主细胞，其中所述酵母是含油酵母。

7.权利要求6的微生物宿主细胞，其中所述含油酵母选自：耶氏酵母属、假丝酵母属、红酵母属、红冬孢酵母属、隐球酵母属、丝孢酵母属和油脂酵母属。

8.用于产生二十碳二烯酸的方法，所述方法包括：

a)提供微生物宿主细胞，所述微生物宿主细胞包含：

(i)编码Δ9延伸酶多肽的重组核苷酸分子，基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14中示出的氨基酸序列进行比较时，所述延伸酶多肽具有至少80％的氨基酸同一性；和

(ii)亚油酸源；

b)使步骤(a)的微生物宿主细胞在使编码Δ9延伸酶多肽的核酸片段表达并使所述亚油酸转化成二十碳二烯酸的条件下生长；以及，

c)任选回收步骤(b)的二十碳二烯酸。

9.用于产生二十碳三烯酸的方法，所述方法包括：

a)提供微生物宿主细胞，所述微生物宿主细胞包含：

(i)编码Δ9延伸酶多肽的重组核苷酸分子，基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14中示出的氨基酸序列进行比较时，所述延伸酶多肽具有至少80％的氨基酸同一性；和

(ii)α-亚麻酸源；

b)使步骤(a)的微生物宿主细胞在使编码Δ9延伸酶多肽的核酸片段表达并使所述α-亚麻酸转化成二十碳三烯酸的条件下生长；以及，

c)任选回收步骤(b)的二十碳三烯酸。

10.权利要求8或9的方法，其中所述微生物宿主细胞是包含如SEQID NO：26中示出的编码Δ9延伸酶多肽的重组核苷酸分子的耶氏酵母属物种，其中所述重组核苷酸分子包含至少98个经最优化以便在耶氏酵母属中表达的密码子。

11.权利要求8或9的方法，其中：

a.)所述重组核酸分子具有选自SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：26的核酸序列；并且

b.)所述宿主细胞是解脂耶氏酵母。

12.如SEQ ID NO：26中示出的编码Δ9延伸酶的分离的核酸分子，其中至少98个密码子经密码子最优化以便在耶氏酵母属物种中表达。