[发明专利]具有免疫原性的物质

说明书

技术领域

本发明涉及一种包含人乳头瘤病毒E7抗原、病毒衣壳蛋白和分子伴侣蛋白的融合蛋白，由所述融合蛋白聚合而成的具有免疫原性的大分子及其应用。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)是小的非包被的双链DNA病毒，与多种疾病相关，可通过皮肤或粘膜表面感染。皮肤HPV感染可导致手或足的疣，可持续几个月到几年，这种良性的病变除个别情况外一般不危及生命，但可造成患者的伤痛。粘膜型HPV感染肛门与生殖器区域以及口腔。至今已经鉴定了接近100种不同类型的HPV。接近40种亚型的HPV特异性感染生殖器和口腔粘膜，这些类型的HPV在感染时不会引起任何症状且不常产生可见的生殖器疣，通常在感染病毒2-3个月后症状逐步显示出来。在感染后3周至许多年可得知发生了感染，因此HPV可以不知不觉地被传播。大部分感染是无症状的，但可导致生殖器疣、肛门或生殖道癌的发生。粘膜型HPV感染引起的生殖器疣被作为多种性传播疾病(STD)中的一种，在全球范围内发生率是单纯疱疹病毒感染的两倍。HPV持续感染可导致癌前病变宫颈内上皮瘤样病变(CIN)，部分进而发展成为宫颈癌，宫颈癌是全球范围内发生率很高的癌症，大多检测到HPV16和HPV18的DNA(＞99％)。宫颈癌的患病率为9.98/10万，每年全球新增500,000名患者，是导致50岁以下妇女死亡的最大诱因。除了宫颈癌，HPV还与许多肛门和肛周癌症相关。

目前已经开发出了预防性疫苗，已经在真核细胞中表达了HPV的主要衣壳蛋白，并且该主要衣壳蛋白在表达宿主中可形成病毒样颗粒(VLP)。纯化的VLP是有效的对抗HPV的预防性疫苗，对于预防HPV感染是有用的。然而，还没有有效的可治愈感染的治疗组合物。因为病毒在复制中使用许多宿主细胞的自身机制，开发在不伤害宿主的情况下抑制病毒复制的药物很困难。已知免疫系统在控制HPV感染中起着重要的作用，接受免疫抑制治疗的人患HPV感染的机率升高也证实许多病毒感染受免疫系统控制。对自然发生的疣的消退的研究也是免疫系统具有控制感染能力的证据。在一些有外生殖器疣的个体中疣会自然消退，组织学研究表明，大量的T淋巴细胞出现在患处，因此认为针对HPV感染的有效免疫反应主要是细胞免疫介导的。而且，抑制疣的自然消退常伴随着淋巴细胞浸润、瘙痒、感染区域发红以及其它细胞介导的免疫反应相关症状。在细胞介导的免疫力受到损害的患者中HPV感染进而引发病损更为常见。因此，诱导有效的抗HPV抗原的细胞介导的免疫反应是研究防治HPV感染的疫苗的重点。

对预防性疫苗的研究集中在L1蛋白，其能够有效地激发机体产生强而持久的体液免疫，因而能够有效预防特定亚型的HPV感染，但不能有效地治疗已感染HPV的病损。E6和E7两种HPV蛋白可诱导和维持细胞转化，它们被表达在感染HPV的肿瘤细胞中，是理想的治疗性靶标。因此，针对E6和E7的治疗组合物可作为控制HPV感染相关疾病的选择。通过使用适当的抗原递呈系统(或抗原载体)，E6和E7或其决定簇可被递送到宿主以引起强烈的、长效的且特异性的细胞介导的免疫反应，这可能可以治愈HPV相关的疾病。

HPV的L1和L2衣壳蛋白已经被用作递送系统来运载HPV的E6或E7蛋白抗原，以诱导细胞介导的免疫反应。由于感染者对于HPV具有一定的免疫力，或由于HPV可在感染者中潜伏或持续感染，HPV可在宿主中产生免疫耐受。事实上，虽然HPV衣壳具有潜在的免疫原性，仅有半数宫颈癌患者可产生衣壳蛋白特异的免疫球蛋白G(IgG)。这种预先存在的由HPV L1或L2衣壳蛋白引起的免疫性或免疫耐受可限制治疗性疫苗的药效。

当在适当的表达系统中重组表达时，获自其它病毒的衣壳蛋白也能够在适当的宿主中自组装成VLP。这些VLP也能用作抗原递送系统(或抗原载体)来提呈E6或E7抗原或其决定簇以诱导细胞介导的免疫反应。然而，在VLP的纯化方面仍然存在问题，如果VLP获自以人为宿主的病毒，其治疗性疫苗也可能面临免疫耐受的问题。

因此，本领域需要提供可用于治疗HPV感染相关疾病的治疗组合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种融合蛋白，该融合蛋白包含人乳头瘤病毒E7抗原，病毒衣壳蛋白和分子伴侣蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种具有免疫原性的大分子，其主要由本发明的融合蛋白自我装配聚合而成。

本发明的另一目的在于提供包含所述的具有免疫原性的大分子的组合物(如疫苗)。

在本发明的第一方面，提供一种融合蛋白，包含以下的蛋白：人乳头瘤病毒E7抗原，病毒衣壳蛋白，和分子伴侣蛋白。