[发明专利]血凝素多肽中有变化的B型流感病毒

权利要求书

1.一种制备在鸡蛋中复制增强的HA糖基化的B型流感病毒的方法，该方法包括：

(a)将导致HA位置141处的氨基酸取代为精氨酸的突变引入B型流感病毒基因组；和

(b)在产生B型流感病毒的条件下复制该突变的流感病毒基因组。

2.如权利要求2所述的方法，其特征在于，通过定点诱变实施所述引入步骤。

3.一种制备在鸡蛋中复制增强的HA糖基化的B型流感病毒的方法，该方法包括：

(a)将多个载体引入一群宿主细胞，所述载体包含对应于以下的核苷酸序列：

(i)第一B型流感病毒株的至少6个内部基因组区段；和

(ii)至少第二B型流感病毒株的编码HA和NA多肽的一个或多个基因组区段，其中所述HA多肽在氨基酸残基141处包含精氨酸；

(b)在不超过35℃的温度下培养该群宿主细胞；和

(c)回收流感病毒。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括在步骤(i)之前：

在所述多个载体的一个载体中引入突变；

其中所述一个载体包含对应于编码HA的基因组区段的核苷酸序列，和

其中所述突变导致氨基酸残基141处为精氨酸。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述第一B型流感病毒具有以下属性之一：温度敏感性、减毒或冷适应性。

6.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述第一B型流感病毒包含以下氨基酸残基：PB2⁶³⁰(630R)；PA⁴³¹(431M)；PA⁴⁹⁷(497H)；NP⁵⁵(55A)；NP¹¹⁴(114A)；NP⁴¹⁰(410H)；NP⁵¹⁰(510T)；M1¹⁵⁹(159Q)和M1¹⁸³(183V)。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤；

在所述多个载体的载体中引入突变；

所述载体包含对应于所述第一B型流感病毒株的6个内部基因组区段的核苷酸序列，和

所述突变导致存在以下氨基酸残基：PB2⁶³⁰(630R)；PA⁴³¹(431M)；PA⁴⁹⁷(497H)；NP⁵⁵(55A)；NP¹¹⁴(114A)；NP⁴¹⁰(410H)；NP⁵¹⁰(510T)；M1¹⁵⁹(159Q)和M1¹⁸³(183V)。

8.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述第一B型流感病毒是病毒株B/Ann Arbor/1/66。

9.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞是Vero细胞、Per.C6细胞、BHK细胞、PCK细胞、MDCK细胞、MDBK细胞、293细胞或COS细胞中的一种。

10.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体是质粒。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述多个载体包含8质粒组，其中所述8质粒中各自包含对应于所述第一或第二B型流感病毒株的不同基因组区段的核苷酸序列。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述多个载体中各质粒包含所有的核苷酸序列。

13.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法不包括利用辅助病毒。

14.如权利要求3所述的方法，其特征在于，通过脂质介导的转染或电穿孔实施所述引入步骤。

15.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述温度介于30-35℃之间。

16.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述温度介于32-35℃之间。