[发明专利]纯化病毒悬浮液的方法

说明书

本发明涉及病毒纯化领域，特别地涉及用于从液体病毒悬浮液获得 病毒的方法。

用于纯化病毒悬浮液的方法在制药领域特别是在疫苗领域中是已 知的。

因此，特别是专利FR2201079描述了一种用于从病毒悬浮液纯化病 毒的方法，其中在区域离心机停止时，将所述病毒悬浮液加入到分带离 心机的转子中；在转子开始缓慢(2000～5000rpm)旋转后，在转子的外周 加入至少两个不同密度的液体缓冲层(coussins de liquide)；接着，一旦转 子被填充了待处理的液体，则将所述转子加速至足以从杂质分离病毒的 速度；以及最后，在转子速度返回到2000～5000rpm之间的速度后，在 周边加入密度等于或大于转子内含物的液体，以通过其中央通道(conduit central)清空转子；随后收集除去杂质的含有病毒的级分。

在旋转过程中，不同密度的缓冲层(cousins)通过扩散被转化成非线 性梯度。

在所述专利中描述的方法是不连续的方法，但是其具有仅可能处理 恒定和有限体积的病毒悬浮液的缺陷，因此必须对待纯化的病毒悬浮液 进行预先浓缩和/或重复该相同操作多次以便处理大体积的液体。

使用这类方法还使具有一种完全在无菌条件下进行的方法尝试变 得复杂。

本发明的目的是一种用于从液体病毒悬浮液获得病毒的方法，根据 该方法，将所述病毒悬浮液进行基于密度梯度超速离心 (ultracentrifugation sur gradient)，特征在于，

-所述超速离心是连续进行的，

-所述密度梯度是包含至少两个平台(palier)的不连续梯度。

因此，可以将该纯化步骤整合到在线制造工艺中，其能够降低污染 的风险，并且能够实现从工业的观点来看是有利的自动化。

根据本发明方法的特定特征，在超速离心机的入口施加给病毒悬浮 液的离心力为36000～60000g，而在外周的出口处离心力以90000～ 120000g存在。

因此，最佳的是病毒能够渗入密度梯度层中，而病毒悬浮液中不期 望的成分则直接穿过超速离心机并被除去，而不渗入该梯度中或者即使 渗入梯度中但迁移非常小。

根据本发明方法另一特定特征，所述密度梯度是平台形式的蔗糖梯 度，这是通过叠置至少两个不同密度的蔗糖层以及缓冲液溶液层而获 得的。

由此获得至少两个很好区别的对应密度的“跳跃”的平台，这能够 很好地分离病毒悬浮液的成分。

通过参考附图阅读后面详细描述的说明书之后，本发明的许多优点 将显现，其中所述附图示意表示可以实施本发明的装置。

图1用示意图描述了用于实施本发明的在停止状态时的装置。

图2用示意图描述了用于实施本发明的在运行状态时的装置。

特别适合实施本发明的超速离心装置的例子是例如描述于专利申 请US 2005/0215410中的装置。

正如在附图中所描绘的，这类装置主要由转子构成，所述转子包含 构成了具有中央核心2的罐的圆柱外壳1。该罐在其下部具有待处理液 体的入口3，在其上部具有出口4。为了简化，没有描绘该装置不同部 分的的驱动手段和固定手段。

在外壳1和核心2之间可以利用的容积被密度梯度所占据，其中根 据本发明，所述密度梯度由至少两个不同密度的层5和6，以及缓冲溶 液层7构成。如图1所示，在停止时，这些密度梯度的层水平叠置，密 度最高的层处于下面，缓冲液层则位于上面。如图2所示，当该装置被 使用时，不同密度的层围绕核心同心地配置，其中密度最高的层在距离 核心最远的位置，而从入口3进入的待处理病毒悬浮液则在通过出口4 被排出之前在接近核心的区域内流通。