[发明专利]使用微粒和独特探针组筛选结合相互作用的方法

说明书

本申请要求2007年5月3日提交的美国临时专利申请60/915,920的优 先权，该专利申请的全文以引用方式并入本文。

发明领域

本发明涉及使用多组微粒筛选结合相互作用的方法，其中所述组具有相 同的可鉴别特征并且其中多组中的一组包括微粒亚群，所述亚群呈现至少一 种独特的探针，该探针用作生物样品中靶分子的结合对象(partner)。具 体来说，本发明提供使用这些多组微粒检测供体组织或受体组织中的组织分 型抗原的方法。

发明背景

一种此类组织分型抗原是人白细胞抗原(HLA)。个体可能在怀孕期间 或通过输血或之前的器官移植而对HLA抗原敏感。测定对HLA等位基因 敏感性的测试涉及组织和器官移植，其中受体中存在抗供体HLA抗原的抗 体(供体特异性交叉配血(crossmatch))是高风险移植排斥的前兆。在移 植领域中标准的实施方式是测试抗一系列经选择代表人群的HLA抗原的所 有可能受体，并检测血清反应性的HLA等位基因的百分比。在这个系列反 应性抗体(PRA)中，患者血清抗正常人群中存在的高百分比HLA等位基因 的测试反应是高风险移植排斥的前兆。

HLA基因座本质上是高度多态的。如Nomenclature for Factors of the HLA System 2000(Hum.Immunol.；62(4)：419-68)，2001)中所公开，有124 种HLA-A等位基因、258种HLA-B等位基因、74种HLA-C等位基因、221 种HLA-DRB1等位基因、19种DRB3等位基因、89种DRB4等位基因、 14种DRB5等位基因、19种DQA1等位基因和39种DQB1等位基因，还 不断发现新的等位基因。作为这种快速过程的证实，世界卫生组织HLA因 子命名委员会(WHO nomenclature Committee for Factors of the HLA System)(www.anthonynolan.com/HIG/)2007年4月的修订本中显示有545 种HLA-A等位基因、895种HLA-B等位基因、307种HLA-C等位基因、8 种HLA-E等位基因、12种HLA-H等位基因、9种HLA-J等位基因、6种 HLA-K等位基因、4种HLA-L等位基因、4种HLA-P等位基因、3种HLA-V 等位基因、3种DRA等位基因、494种DRB1等位基因、1种DRB2等位基 因、44种DRB3等位基因、13种DRB4等位基因、18种DRB5等位基因、 3种DRB6等位基因、2种DRB7等位基因、10种DRB8等位基因、1种 DRB9等位基因、34种DQA1等位基因、83种DQB1等位基因、23种DPA1、 126种DPB1等位基因、4种DMA等位基因、7种DMB等位基因、12种 DOA等位基因和9种DOB等位基因。

所有的HLA-A、-B和-C等位基因都具有类似的序列。对于DRB1、 DRB3、DRB4和DRB5序列情况也相同。由于这些相似性，极为通常的情 况是当引物对用于实施聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR SSP)时，将扩 增两种或更多种等位基因，或者在诊断性序列特异性寡核苷酸探针检测 (SSO)体系中，两种或多种等位基因将杂交。因此，对于各个等位基因，要 具有独特的PCR-SSP或检测-SSO模式，必须使用许多对引物或探针。此外， 在HLA分型中诊断杂交SSO探针的使用会被HLA等位基因所具有的高水 平的同源性所混淆。因此，许多现有的分型方法(如Bugawan等人，Tissue Antigens 44：137-147(1994)中的那些)缺乏HLA分型和其他应用所需的准 确度。