[发明专利]新型兔抗体人源化方法和人源化的兔抗体

权利要求书

1.包含至少一个重链和轻链多肽的人源化抗体或抗体片段，其中所述轻链多肽是人源化轻链多肽，其包含至少下述：(i)跨越FR1的第一个残基到FR3的末端的氨基酸残基，包括选择自人种系序列文库的人轻链种系序列的CDR1和CDR2区域，所述选择基于其跨越FR1到FR3的所选择的氨基酸残基(相对于文库中的其他人轻链序列)与待人源化的对所需抗原具有特异性的亲本兔抗体轻链的相对应氨基酸残基的更大同源性(序列同一性百分比)；和(ii)进一步其中相对应相同亲本兔抗体的轻链中的“选择性决定残基”在CDR1和CDR2中的CDR残基用相对应兔选择性决定残基替换；(iii)包含相同亲本兔抗体的整个CDR3区域的氨基酸残基；(iv)基于其与相同亲本兔抗体的轻链中包含的相对应FR4区域的更大同源性(序列同一性)，包含衍生自人种系序列文库的抗体轻链的整个FR4区域的氨基酸残基；和(v)其中所选择的同源人FR区域中的人FR1、FR2、FR 3和FR4区域的少数或无FR残基用相对应兔FR残基替代。

2.权利要求1的人源化抗体，其中所述亲本兔抗体对人、病毒或细菌抗原特异。

3.权利要求2的人源化抗体，其中所述人抗原是细胞因子、生长因子、激素或癌抗原。

4.权利要求1的人源化抗体，其对IL-6、海帕西啶、肝细胞生长因子或TNF多肽特异。

5.核酸序列，其编码权利要求1、2、3或4任一项中所述的人源化抗体中包含的人源化抗体轻链。

6.载体，其包含根据权利要求5的核酸序列。

7.细胞，其包含根据权利要求6的载体。

8.权利要求7的细胞，其选自酵母、细菌和哺乳动物细胞。

9.权利要求8的细胞，其是二倍体酵母细胞。

10.权利要求9的细胞，其是毕赤酵母属或其他甲醇利用二倍体酵母。

11.包含至少一个重链和轻链多肽的人源化抗体或抗体片段，其中所述重链多肽是人源化重链多肽，其包含至少下述：(i)跨越FR1的第一个残基到FR3的末端的氨基酸残基，包括由选择自人种系序列文库的人种系序列编码的CDR1和CDR2区域，所述选择基于其跨越FR1到FR3的所选择的氨基酸残基(相对于文库中的其他人种系序列)与待人源化的对所需抗原具有特异性的亲本兔抗体重链的相对应氨基酸残基的更大同源性(序列同一性百分比)；和(ii)进一步其中对应于相同亲本兔抗体的重链的CDR1和CDR2区域中的“选择性决定残基”在人重链的CDR1和CDR2区域中的CDR残基用兔重链的CDR1和CDR2区域中包含的相对应重链选择性决定残基替换；(iii)包含相同亲本兔抗体的整个CDR3区域的氨基酸残基；(iv)基于其与相同亲本兔抗体的重链中包含的相对应FR4区域的更大同源性(序列同一性)，衍生自人种系序列文库的FR4区域；和(v)其中人重FR1区域的最后1-3个氨基酸任选用相对应兔重链FR1残基的末端1-3个氨基酸替换；和/或人重链构架2区域的末端氨基酸任选用兔重链构架2的相对应末端氨基酸残基替换；和/或来自兔重链CDR2的末端的第4个氨基酸(一般是色氨酸)任选用相对应人CDR2残基(一般是丝氨酸)替换；和(vi)其中所选择的同源人FR区域的少数或无其余FR残基用相对应兔FR残基替代。

12.权利要求11的人源化抗体，其中所述亲本兔抗体对人、病毒或细菌抗原特异。

13.权利要求12的人源化抗体，其中所述人抗原是细胞因子、生长因子、激素或癌抗原。

14.权利要求11的人源化抗体，其对IL-6、海帕西啶、肝细胞生长因子或TNF多肽特异。

15.核酸序列，其编码权利要求11、12、13或14任一项中所述的人源化抗体中包含的人源化抗体重链。

16.载体，其包含根据权利要求15的核酸序列。

17.细胞，其包含根据权利要求16的载体。

18.权利要求17的细胞，其选自酵母、细菌和哺乳动物细胞。

19.权利要求18的细胞，其是二倍体酵母细胞。

20.权利要求19的细胞，其是毕赤酵母属或其他甲醇利用二倍体酵母。