[发明专利]GLP-1-Fc融合蛋白质制剂

说明书

发明领域

本发明涉及胰高血糖素样肽类似物的可商购制剂，所述的胰高血糖素样肽类似物与免疫球蛋白的Fc部分融合。该制剂可以用于治疗糖尿病和肥胖症以及多种其它病症或障碍。

发明背景

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物和衍生物有希望在临床试验中用于治疗2型糖尿病。GLP-1诱导多种生物学效应，例如刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、抑制胃排空、抑制胃运动或肠运动，并且诱导重量减轻。GLP-1的显著特征是其刺激胰岛素分泌而不伴有低血糖相关危险的能力，所述低血糖相关危险见于应用胰岛素治疗或通过增加胰岛素表达起作用的某些类型的口服治疗时。

GLP-1(1-37)活性很低，并且GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH₂这两种天然存在的截短的肽在体内被迅速清除，并且具有极短的体内半寿期这一事实限制了涉及GLP-1肽的治疗的有效性。已知内源性产生的二肽基肽酶IV(DPP-IV)通过除去N端组氨酸和丙氨酸残基而使循环GLP-1肽失活，并且这是体内短半寿期的主要原因。

已经采取多种途径以在保持生物学活性的同时延长GLP-1肽的清除半寿期或降低该肽从机体的清除。一条途径涉及将GLP-1肽与免疫球蛋白Fc部分融合。免疫球蛋白典型地具有长体内循环半寿期。

例如，IgG分子在人体内具有至多23天的半寿期。免疫球蛋白Fc部分是这种体内稳定性的部分原因。在保留GLP-1分子生物学活性的同时，GLP-1-Fc融合蛋白质具有由免疫球蛋白Fc部分提供的稳定性的优点。

尽管此途径对于GLP-1疗法(参见WO 02/46227)是可行的，但是对多种融合蛋白质长时期反复施用时的抗原性存在普遍的顾虑。对于GLP-1-Fc融合体疗法，这尤其是一个顾虑，因为糖尿病患者一旦经诊断患有该疾病，就必须一生接受治疗。此外，如果Fc部分保留不需要的效应子功能，Fc融合蛋白质疗法可能是一个顾虑。该方法是PCT/US04/15595(WO2005/000892)的焦点，其中通过鉴定特别GLP-1-Fc融合蛋白质克服了与施用GLP-1-Fc融合蛋白质相关的关于潜在免疫原性和效应子活性的问题，所述特别GLP-1-Fc融合蛋白质反复和长期施用后，诱导免疫响应风险降低并且不再具有效应子功能。

对于在细菌细胞中合成产生或重组产生具有这种性质的融合蛋白质，在技术上过于庞大和复杂。这些融合蛋白质典型地在哺乳动物细胞、例如CHO、293或NS0中产生。观察到在哺乳动物细胞中产生的融合蛋白质比在细菌细胞中产生的非融合蛋白质更易于被内源蛋白酶降解以及化学改变。该问题试图在PCT/US 2005/045376(WO2006/068910)中克服，其中发现了包含GLP-1-Fc融合蛋白质，缓冲在约pH 6至约pH 8.5之间的制剂提供了增加的化学稳定性。

另外，当在检查中存在由宿主细胞蛋白酶引起的不稳定性时，如果其在物理上不稳定，该制剂可能不适合。本发明人还观察到另外一个问题是溶液制剂在长期贮存后形成可溶聚集物和不可溶颗粒。该问题试图通过赋形剂的特别组合和GLP-1-Fc融合蛋白质的特别浓度来克服。

发明概述

为了克服GLP-1-Fc融合蛋白质的溶液制剂在长期贮存后形成可溶聚集物和不可溶颗粒的问题，本发明人已经开发了物理和化学上稳定的溶液制剂，该溶液制剂包含约0.5至约10mg/mL GLP-1-Fc融合蛋白质、5至20mM柠檬酸盐缓冲液、0.01至0.05％(w/v)聚山梨酯-80和4.0至5.3％(w/v)甘露醇，并且pH为6-7。该制剂意外地并且相当大地提供了在长期贮存后形成较少的可溶聚集物和不可溶颗粒。另外，本发明人发现该溶液制剂经长期贮存后在注射器中比在小瓶中更稳定。

本发明还包括治疗患有糖尿病和肥胖症以及多种其它病症或障碍的患者的方法，该方法包括施用GLP-1-Fc融合蛋白质制剂。

发明详述

本发明的GLP-1-Fc融合蛋白质包含GLP-1化合物，其在C-端通过肽连接体与免疫球蛋白的Fc部分的类似物的N-端融合。融合蛋白质在生物学上用作单体或者用作同型二聚体并且比天然GLP-1具有增加的半寿期。优选的GLP-1-Fc融合蛋白质包含(SEQ ID NO：1)中给出的氨基酸序列。更优选的GLP-1-Fc融合蛋白质基本由(SEQ ID NO：1)中给出的氨基酸序列组成。最优选的GLP-1-Fc融合蛋白质由(SEQ ID NO：1)中给出的氨基酸序列组成。