[发明专利]分离基质

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的分离基质，其对于用于目标化合物的离析(通 常是从液体中离析生物分子)的多种方法是有用的。本发明的分离基质 提供非常有益的结合量，且其允许快速平衡，这两种益处都有利于使 方法更加经济，特别是在生物分子的大规模纯化中。本发明还包含一 种制备这种分离基质的方法和使用该分离基质将目标化合物与液体 分离的方法。

背景

在当今的生物技术学领域，其中一种被最广泛使用的分离方法是 色谱法。术语色谱法包含一类紧密相关的分离方法。区分色谱法与大 多数其他物理分离法和化学分离法的特点在于，两种互不混溶相被接 触，其中一个相是固定的，另一个相是流动的。被引入流动相的样品 混合物经受一系列的相互作用，即当样品混合物通过流动相被携带通 过系统时，在固定相和流动相之间分配很多次。相互作用利用了在样 品中的成分的物理性质或化学性质的差别。这些差别在流动通过包含 固定相的柱的流动相的影响下决定单个成分的移动速率。分离的成分 以某种次序出现，这取决于它们与固定相的相互作用。最不受阻滞的 成分最先洗脱，被最牢固地保留的物质最后洗脱。分离是在一种成分 被充分阻滞以阻止当样品成分从柱中洗脱时与相邻溶质的区域重叠 时实现的。

最近提出的色谱法基于与目标物相互作用的不同模式。因此，例 如，在离子交换色谱法中，官能团是永久结合的离子基团以及它们的 具有相反的电荷的抗衡离子，而在疏水相互作用色谱法(HIC)中，在固 定相和要被分离的成分之间的相互作用是基于疏水性。其他色谱分离 原理为本领域的技术人员所熟知。

固定相(也被称为分离基质)包含载体和偶联(couple)至载体的配 体，载体通常是多个本质上是球形的颗粒。在大多数的分离基质中， 载体是多孔的以允许在每个颗粒中存在更多量的配体，因而允许在每 个颗粒中存在更多的被结合的目标化合物。

US 6,428,707(Amersham Biosciences AB)涉及通过吸附至含有珠 粒(其呈现对物质具有亲和性的配体)的非填充床来分离物质的方法。 所公开的方法声称改善在流化床上的吸附过程的总产率；改善在流化 床上的生产率和提供在流化床中具有改善的穿透量(breakthrough capacity)的基质。根据发明人所述，这通过利用下述珠粒来完成：在 该珠粒中，配体经由延伸剂(extender)被连接至珠粒的基础基质。根据 该专利，在该专利中所记载的和由延伸剂引起的积极效果被认为在 于，它将为珠粒的内表面(孔表面)和/或外表面提供柔性聚合物层，该 柔性聚合物层可渗透大分子和被允许穿过床的其他分子，导致有效相 互作用体积和配体的空间可用性的增加，这又导致传质速率和总容量 的增加。

EP 1764152(Millipore Corporation)涉及不对称多孔吸附性珠粒，其 包含第一区域和第二区域。至少一个特征将第一区域与第二区域区分 开来，该特征可以是孔径分布、配体密度、配体类型、配体混合物、 介质材料和琼脂糖百分数。

US 6,572,766(等)涉及一种包括核心部的基质，该核心 部显示出微孔系统和表面，其中微孔系统具有开口。根据该专利，可 以在相同色谱介体上实现不同分离原理的合作，且通过这种方法减小 了在纯化方法中的必要分离步骤的数目。更具体地，这是通过使用分 子量大得不能渗透进入微孔的聚合物来涂布表面而实现的。在几种情 况下，感兴趣的微孔小于1μm，但也可更大些，这取决于成品基质的 预期用途。在很多情况下，微孔与扩散孔相当。