[发明专利]遗传修饰的光合生物的高通量筛选

权利要求书

1.一种筛选转化的非维管光合生物的方法，其包括如下步骤：

a.从所述生物的叶绿体扩增第一核酸序列；

b.从所述生物的所述叶绿体扩增第二核酸序列；以及

c.基于从所述第一序列和第二序列扩增的结果，测定所述生物的原生质状态。

2.权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二步骤同时进行。

3.权利要求1所述的方法，其中所述第一核酸序列是内源叶绿体基因组序列。

4.权利要求3所述的方法，其中所述第二核酸序列至少部分来自外源核酸。

5.权利要求1所述的方法，其进一步包括从所述叶绿体扩增第三核酸序列作为对照的步骤。

6.权利要求5所述的方法，其中所述第三核酸是野生型序列，其在外源核酸整合后保持完整。

7.权利要求5所述的方法，其中所述扩增第三核酸与所述第一或第二扩增步骤同时进行。

8.权利要求5所述的方法，其中所有的所述扩增步骤同时进行。

9.权利要求1所述的方法，其中至少一种引物是SEQ ID NO.1、SEQID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、或SEQ ID NO.15。

10.权利要求1所述的方法，其中所述第一或第二扩增步骤包括大于三十个循环的PCR。

11.权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二扩增步骤包括大于三十个循环的PCR。

12.权利要求1所述的方法，其中所述原生质状态是同质性。

13.权利要求1所述的方法，其中所述生物是微观藻类。

14.权利要求13所述的方法，其中所述微观藻类是莱茵衣藻(C.reinhardtii)、盐生杜氏藻(D.salina)或雨生红球藻(H.pluvalis)。

15.权利要求1所述的方法，其中所述测定步骤包括视觉分析所述扩增步骤得到的产物。

16.权利要求1所述的方法，其中所述生物包括外源核酸，其包括至少一种感兴趣的基因和选择标记。

17.权利要求16所述的方法，其中所述感兴趣的基因编码生物质降解酶。

18.权利要求17所述的方法，其中所述生物质降解酶是分解纤维素的、分解半纤维素的或分解木质素的。

19.权利要求17所述的方法，其中所述生物质降解酶是外切-β-葡聚糖酶、内切-β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、内切木聚糖酶或木质酶。

20.权利要求16所述的方法，其中所述外源核酸是SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.30或SEQ ID NO.31。

21.权利要求1所述的方法，其中至少一个所述扩增步骤包括实时PCR。

22.权利要求1所述的方法，其中至少一个所述扩增步骤包括定量PCR。

23.非维管光合生物，其包括同质叶绿体群体，其中所述叶绿体群体包括外源核酸，以及其中同质性由至少两个不同的PCR反应测定。

24.权利要求23所述的生物，其中所述叶绿体群体是多于一个的叶绿体。

25.权利要求23所述的生物，其中所述生物是微观藻类。

26.权利要求25所述的生物，其中所述微观藻类是莱茵衣藻(C.reinhardtii)、盐生杜氏藻(D.salina)或雨生红球藻(H.pluvalis)。