[发明专利]κ-卡拉胶酶和包含κ-卡拉胶酶的组合物

说明书

技术领域

本发明提供了包含至少一种卡拉胶酶的清洁组合物，在宿主细胞中生产卡拉胶酶的方法，包含编码至少一种卡拉胶酶的重组多核苷酸的宿主细胞，和编码卡拉胶酶的重组多核苷酸。

背景技术

清洗剂和其他清洁组合物通常包括活性成份的复杂组合。例如，大多数洗涤产品包括表面活性剂系统，用于洗涤的酶，漂白剂，助洗剂，抑泡剂，悬污剂，去污剂，荧光增白剂，软化剂，分散剂，抗染料转移剂，摩擦剂，杀细菌剂和香料。当前的清洗剂虽有复杂性，仍有很多难于完全去除的污渍，这是由于污渍混合物的复杂性，尤其那些包括纤维材料的污渍混合物，尤其是那些包含碳水化合物和/或碳水化合物衍生物，纤维，细胞壁成分(例如，植物材料，木材，基于泥/粘土的污物，和水果)，和食品添加剂(例如，食物组织处理和稳定添加剂例如卡拉胶)的污渍混合物。因此，本领域依然需要有效除去这些纤维材料的清洗组分。

发明概述

本发明提供了包含至少一种卡拉胶酶的清洁组合物，在宿主细胞中生产卡拉胶酶的方法，包含编码至少一种卡拉胶酶的重组多核苷酸的宿主细胞，和编码卡拉胶酶的重组多核苷酸。

本发明涉及编码卡拉胶酶多肽的多核苷酸和已经被基因操纵以产生卡拉胶酶的宿主细胞。本发明尤其涉及具有引入其中的编码至少一种卡拉胶酶的外源核酸序列的革兰氏阳性微生物，和在这样的宿主细胞中生产卡拉胶酶蛋白的方法。在一些实施方式中，革兰氏阳性微生物是芽孢杆菌属的成员。在一些实施方式中，本发明提供用芽孢杆菌宿主细胞生产κ-卡拉胶酶的方法和组合物。

在一些实施方式中，本发明提供了一种分离的包含编码κ-卡拉胶酶的序列的重组多核苷酸，其中，分离的多核苷酸有效连接于编码分泌信号肽的多核苷酸序列。在一些实施方式中，编码分泌信号肽的序列来自革兰氏阳性微生物。在一些实施方式中，分泌信号肽是SEQ ID NO：10的AprE信号肽。在一些实施方式中，编码卡拉胶酶的序列包含一种序列，这种序列优化自编码野生型卡拉胶酶(例如，获自交替单胞菌属(Alteromonas sp.)的野生型κ-卡拉胶酶)的多核苷酸。在一些实施方式中，编码卡拉胶酶的序列包含一种序列，这种序列优化自编码获自食鹿角菜交替单胞菌(Alteromonas carrageenovora)的野生型卡拉胶酶的多核苷酸。在一些实施方式中，优化的多核苷酸序列与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少约70％同一性。在其它的实施方式中，密码子优化的序列与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少约75％同一性，或与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3至少有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％同一性。

在一些实施方式中，本发明提供了一种表达载体，其含有包含编码κ-卡拉胶酶的分离的重组多核苷酸的表达盒。编码κ-卡拉胶酶的分离的多核苷酸有效连接于编码分泌信号肽的多核苷酸序列。在一些实施方式中，编码分泌信号肽的序列来自革兰氏阳性微生物。在一些实施方式中，分泌信号肽是SEQ ID NO：10的AprE信号肽。在一些实施方式中，编码卡拉胶酶的序列包含一种序列，这种序列优化自编码野生型卡拉胶酶(例如，获自交替单胞菌属的野生型κ-卡拉胶酶)的多核苷酸。在一些实施方式中，编码卡拉胶酶的序列包含一种序列，这种序列优化自编码获自食鹿角菜交替单胞菌的野生型卡拉胶酶的多核苷酸。在一些实施方式中，优化的多核苷酸序列与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少约70％同一性。在其它的实施方式中，密码子优化的序列与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少约75％同一性，或与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％同一性。在一些实施方式中，表达载体含有具有选自SEQ IDNO：14和15的多核苷酸序列的表达盒。