[发明专利]乳酸菌来源的双链RNA

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳酸菌来源的双链RNA及其制备方法。

背景技术

生物体内的免疫系统在由细菌、酵母、霉、病毒等微生物产生的感染、对肿瘤的预防、变态反应的发病中发挥重要的作用。众所周之，在老化或应激、癌等疾病下该免疫系统的机能下降，为了预防微生物感染、抗肿瘤、预防变态反应等，寻求一种安全且价廉、高效的免疫调节剂。

众所周之，乳酸菌为有丰富的食用经验的且安全的微生物，而且，据报道其具有整肠作用、降低血清胆固醇作用、免疫激活作用和抗变态反应作用等免疫调节作用等各种功能性(例如，参照非专利文献1)。作为具有免疫调节作用的益生菌乳酸菌，作为市售的乳酸菌，可以列举属于链球菌(Streptococcus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属的乳酸菌等。这些乳酸菌可以用于乳制品(酸乳酪、酸乳酪饮料等)的发酵。

以前，以乳酸菌为有效成分的免疫激活剂或抗变态反应剂等免疫调节剂是众所周之的(例如，参照专利文献1-12)。报告了作为以这些乳酸菌为有效成分的免疫调节剂的相关成分：细胞壁成分的肽聚糖(例如，参照非专利文献2)、脂磷壁酸(例如，参照非专利文献3)、脂蛋白(例如，参照非专利文献4)、核酸(例如，参照非专利文献5、6)、热休克蛋白(heat shockprotein)(例如，参照非专利文献7)等。

这些相关成分中，作为核酸成分有过报告的是，DNA的CpG基序(例如，参照非专利文献5)、AT基序(例如，参照非专利文献6)。

现在，作为托尔样(Toll-like)受体(以下称为“TLR”)，已知人存在10种TLR。TLR为存在于细胞膜的一种蛋白质，识别细胞外的病原体等，通过向细胞内传递该信息，从而生产干扰素和细胞因子。

其中，已知TLR3识别病毒的双链RNA，诱导MyD88非依赖性干扰素β启动子的活化以及干扰素β的产生。而且，干扰素β活化树突状细胞，产生白细胞介素12、TNF等炎性细胞因子。进而，白细胞介素12诱导初始T细胞分化为1型辅助性T(Th1)细胞，从而确立细胞免疫。

双链RNA是指通常在RNA病毒中可特异性看到的结构。病毒感染宿主细胞内并利用宿主的系统进行病毒基因组的复制，此时，形成双链RNA。此外，也作为双链RNA病毒的基因组，存在双链RNA。

此外，虽然极少有报告，但是细菌在某应激条件下形成双链RNA是众所周之的。例如，在大肠菌中，通过铁离子枯竭应激合成RyhB这一低分子RNA。该低分子RNA形成了编码含有sodB mRNA的铁结合蛋白的mRNA和部分的碱基对，产生双链RNA(例如，参照非专利文献8)。但是，无法得知这些双链RNA是否具有免疫调节作用。此外，到目前为止，还没有报告在乳酸菌中存在双链RNA。

像上述那样，由于病毒的双链RNA介由TLR3诱导细胞免疫，作为免疫激活剂是优选的，但是，病毒本身作为免疫激活剂来利用，在安全性方面是不现实的，需要用于确保安全性的办法。

一个解决方案为利用确保了安全性的人工的双链RNA分子。实际上，作为人工的双链RNA分子的PolyI：PolyC由于具有干扰素诱导效果，自古以来作为抗癌剂和抗病毒药进行了研究。但是，通常用于生物体方面，必须是将需要的药物有效地吸收至细胞内的系统。例如，为了使PolyI：PolyC在人体内有效地起作用，需要进行脂质体制剂化(例如，参照非专利文献9)。

从这样的背景来看，寻求一种可以作为免疫激活剂加以利用、安全且有效地吸收至细胞的双链RNA。

专利文献1：日本特开平6-80575号公报

专利文献2：日本特开平9-227392号公报

专利文献3：日本特开平7-228536号公报

专利文献4：日本特开平10-167972号公报

专利文献5：日本特开平8-99887号公报

专利文献6：日本特开平5-252900号公报

专利文献7：日本特开2003-113114号公报

专利文献8：日本特开2004-26729号公报

专利文献9：日本特开2004-18469号公报

专利文献10：日本特开2000-95697号公报

专利文献11：日本特开平10-309178号公报

专利文献12：日本特开平9-2959号公报

非专利文献1：乳酸菌的科学和技术；学会出版中心(1996)