[发明专利]在多肽的重组生产期间防止二硫键还原

权利要求书

1.一种用于防止重组宿主细胞中表达的多肽中二硫键还原的方法，包括给所述宿主细胞的收获前的或已收获的培养液补充硫氧还蛋白抑制剂。

2.权利要求1的方法，其中向所述收获前的培养液添加所述硫氧还蛋白抑制剂。

3.权利要求1的方法，其中向已收获的培养液添加所述硫氧还蛋白抑制剂。

4.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是硫氧还蛋白的直接抑制剂。

5.权利要求4的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是烃基-2-咪唑基二硫化物或萘醌螺酮缩醇衍生物。

6.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是硫氧还蛋白还原酶的特异性抑制剂。

7.权利要求6的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是金复合物。

8.权利要求7的方法，其中所述金复合物是金硫葡糖(ATG)或金硫苹果酸(ATM)。

9.权利要求8的方法，其中所述ATG或所述ATM以介于约0.1mM和约1mM之间的浓度添加。

10.权利要求8的方法，其中所述ATG或所述ATM以所述收获前的或已收获的培养液中硫氧还蛋白还原酶浓度至少约四倍的浓度添加。

11.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是金属离子。

12.权利要求11的方法，其中所述金属离子选自下组：Hg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Co²⁺和Mn²⁺。

13.权利要求12的方法，其中所述金属离子是以硫酸铜的形式存在的Cu²⁺。

14.权利要求13的方法，其中所述硫酸铜是五水合物的形式或无水的形式。

15.权利要求13的方法，其中所述硫酸铜以介于约5μM和约100μM之间的浓度添加。

16.权利要求13的方法，其中所述硫酸铜以介于约10μM至约80μM之间的浓度添加。

17.权利要求13的方法，其中所述硫酸铜以介于约15μM和约50μM之间的浓度添加。

18.权利要求13的方法，其中所述硫酸铜以所述收获前的或已收获的培养液中硫氧还蛋白浓度至少约两倍的浓度添加。

19.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是G6PD的抑制剂。

20.权利要求19的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂选自下组：吡哆醛-5’-磷酸、1-氟-2，4-二硝基苯、脱氢表雄酮(DHEA)和表雄酮(EA)。

21.权利要求20的方法，其中所述DHEA以介于约0.05mM和约5mM之间的浓度添加。

22.权利要求20的方法，其中所述DHEA以介于约0.1mM和约2.5mM之间的浓度添加。

23.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是己糖激酶活性的抑制剂。

24.权利要求23的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是金属离子的螯合剂。

25.权利要求24的方法，其中所述金属离子的螯合剂是乙二胺四乙酸(EDTA)。

26.权利要求25的方法，其中所述EDTA以介于约5mM和约60mM之间的浓度添加。

27.权利要求25的方法，其中所述EDTA以介于约10mM和约50mM之间的浓度添加。

28.权利要求25的方法，其中所述EDTA以介于约20mM和约40mM之间的浓度添加。

29.权利要求23的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂选自下组：山梨糖-1-磷酸、多磷酸、6-脱氧-6-氟葡萄糖、2-C-羟基-甲基葡萄糖、木糖和来苏糖。

30.权利要求1的方法，其中所述硫氧还蛋白抑制剂是胱氨酸、半胱氨酸、或氧化型谷胱甘肽。