[发明专利]具有单读出的通用激酶/磷酸酶测定法

权利要求书

1.检测激酶活性或磷酸酶活性的方法，其包括以下步骤：

a)孵育激酶或磷酸酶活性样品与包含具有可检测读出的荧光团的激酶或磷酸酶底物分子，

b)孵育步骤a)的混合物与包含芳族基的检测实体和结合配偶体，其中磷酸化底物分子和检测实体能与结合配偶体结合，并且底物分子和检测实体与结合配偶体的结合导致改变的荧光团读出，和

c)测量步骤b)的混合物中的荧光团读出，其中与空白相比改变的荧光团读出指示样品中激酶或磷酸酶活性的存在。

2.检测激酶活性或磷酸酶活性的方法，其包括以下步骤：

a)孵育激酶或磷酸酶活性样品与包含芳族基的底物分子，

b)孵育步骤a)的混合物与包含具有可检测读出的荧光团的检测实体和结合配偶体，其中磷酸化底物分子和检测实体能与结合配偶体结合，并且底物分子和检测实体与结合配偶体的结合导致改变的荧光团读出，和

c)测量步骤b)的混合物中的荧光团读出，其中与空白相比改变的荧光团读出指示样品中激酶或磷酸酶活性的存在。

3.权利要求1或2的方法，其中荧光团选自由荧光素、罗丹明B、TMR、ATTO 590、ATTO 655、ATTO 680、Atto 700、MR 121、Bodipy 630/650和Bodipy FL组成的组，更优选选自由ATTO 590、ATTO 655、ATTO 680、Atto 700和MR 121组成的组。

4.权利要求3的方法，其中荧光团为MR 121或Atto 700。

5.权利要求1-4的方法，其中芳族基选自由氨基酸——色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸组成的组，优选色氨酸。

6.权利要求1-5的方法，其中底物分子和检测实体与结合配偶体的结合涉及离子相互作用。

7.权利要求1-6的方法，其中结合配偶体选自硬路易斯酸金属离子或在其表面具有离子的固体如珠子。

8.权利要求1-7的方法，其中检测实体为包含磷酸酪氨酸和/或磷酸丝氨酸和/或磷酸苏氨酸的肽。

9.权利要求1-8的方法，其中底物分子为包含至少一个酪氨酸和/或色氨酸和/或苏氨酸的肽。

10.权利要求9的方法，其中所述方法用于检测酪氨酸激酶活性且所述底物肽包含至少一个酪氨酸。

11.权利要求9的方法，其中所述方法用于检测色氨酸激酶活性且所述底物肽包含至少一个色氨酸。

12.权利要求9的方法，其中所述方法用于检测苏氨酸激酶活性且所述底物肽包含至少一个苏氨酸。

13.权利要求1-9的方法，其中所述方法用于检测磷酸酶活性且所述底物分子为包含磷酸基、优选磷酸酪氨酸或磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的肽。

14.权利要求1-13的方法，其中所述荧光团读出为荧光强度。

15.用于检测激酶或磷酸酶活性的试剂盒，其包括包含具有可检测读出的荧光团的激酶和/或磷酸酶活性底物、检测实体和结合配偶体。

16.用于检测激酶或磷酸酶活性的试剂盒，其包括包含芳族基的激酶和/或磷酸酶活性底物、包含具有可检测读出的荧光团的检测实体和结合配偶体。

17.基本上如前文所述、尤其参考前面的实施例描述的方法和试剂盒。