[发明专利]使胚胎干细胞分化成表达AQP-1的细胞的方法

权利要求书

1.一种使人胚胎干(hES)细胞分化成表达AQP-1的细胞的方法，该方法包括：

在足够诱导hES细胞分化成表达AQP-1的细胞的条件下，在细胞外基质(ECM)分子存在下，在肾特异性培养基中培养未分化的hES细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肾特异性培养基包括肾上皮基础培养基或肾上皮生长培养基。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述ECM分子包括纤连蛋白、层粘连蛋白、IV型胶原和基质胶基质中的至少一种。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述肾特异性培养基包含表皮生长因子。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其进一步包括在所述培养之前或期间将骨形态生成蛋白2加入到所述肾特异性培养基中。

6.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在所述培养之前或期间将骨形态生成蛋白2以约2.5～约10ng/ml的浓度加入到所述肾特异性培养基中，其中，所述培养包括使所述细胞生长7-10天，所述肾特异性培养基包含肾上皮生长培养基，以及所述ECM分子包含基质胶基质，并且其中，所述细胞一旦分化即表达AQP-1以及CK-18、β-连环蛋白、CD-326和CD-133中的至少一种。

7.一种在细胞外基质分子存在下并且在肾特异性培养基中由人胚胎干细胞群体直接分化的细胞群体，其中，约2％～约50％的细胞表达AQP-1。

8.根据权利要求7所述的细胞群体，其用权利要求1～6中任一项所述的方法制备。

9.一种生物人工小管辅助装置，其包括具有内腔的中空纤维和权利要求7或8所述的细胞群体，所述内腔用细胞外基质(ECM)分子涂覆。

10.一种制备生物人工小管辅助装置的方法，该方法包括提供包括具有内腔的中空纤维的生物人工小管辅助装置以及将权利要求7或8所述的细胞群体接种到内腔中，其中，在将所述细胞群体接种之前，用细胞外基质分子涂覆所述内腔。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述内腔用包括纤连蛋白、层粘连蛋白、IV型胶原和基质胶基质中的至少一种的细胞外基质分子涂覆。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，将所述细胞群体培养成覆盖所述内腔的铺满的单层。

13.一种在需要治疗的被试者中治疗肾有关的疾病的方法，该方法包括在被试者需要表达AQP-1的细胞的部位中植入有效量的权利要求7或8所述的细胞群体。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，在权利要求9所述的生物人工小管辅助装置内提供所述细胞群体。

15.一种在被试者中治疗肾有关的疾病的方法，其包括将权利要求9所述的生物人工小管辅助装置外部连接到需要治疗的被试者上。

16.根据权利要求13～15中任一项所述的方法，其中，所述肾有关的疾病包括肾衰竭、肾病、糖尿病肾病、肾变病、布赖特氏病、肾机能不全、肾小球炎、肾小球硬化症或肾炎。