[发明专利]表位标记的丙型肝炎病毒颗粒的制备和应用

权利要求书

1.一种核酸，其包含以下(a)、(b)或(c)，并且包含位于(a)、(b)、或(c)的E2蛋白编码序列中的高变区1(HVR1)处的编码表位标签肽的核酸序列：

(a)丙型肝炎病毒(HCV)JFH-1株的基因组；

(b)嵌合丙型肝炎病毒(HCV)基因组，其包含：HCV J6CF株的5′-非翻译区、核心蛋白编码序列、E1蛋白编码序列、E2蛋白编码序列和p7蛋白编码序列；以及HCV JFH-1株的NS2蛋白编码序列、NS3蛋白编码序列、NS4A蛋白编码序列、NS4B蛋白编码序列、NS5A蛋白编码序列、NS5B蛋白编码序列和3′-非翻译区；或

(c)嵌合丙型肝炎病毒(HCV)基因组，其包含：JFH-1株的5′-非翻译区；HCV TH1株的核心蛋白编码序列、E1蛋白编码序列、E2蛋白编码序列和p7蛋白编码序列；以及HCV JFH-1株的NS2蛋白编码序列、NS3蛋白编码序列、NS4A蛋白编码序列、NS4B蛋白编码序列、NS5A蛋白编码序列、NS5B蛋白编码序列和3′-非翻译区。

2.权利要求1的核酸，其中所述表位标签肽包含氨基酸序列DYKDDDDK或DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK。

3.权利要求1或2的核酸，其中所述表位标签肽进一步包含接头序列。

4.权利要求3的核酸，其中所述接头序列包括：GGG序列、GGGGS序列或(GGGGS)₃序列、或含有在序列GGG、GGGGS或(GGGGS)3的一部分中缺失、取代或添加1-10个氨基酸的序列。

5.权利要求1-4中任一项的核酸，所述核酸如SEQ ID NO：11、12、30、31、41或42所示，其中当核酸是RNA时，在序列表中所示的核苷酸″T″读作″U″。

6.权利要求1-5中任一项的核酸，当将位于高变区1(HVR1)序列末端之后的氨基酸指定为第1位氨基酸时，所述核酸包含第122或124位的天冬酰胺取代为赖氨酸的突变。

7.权利要求6的核酸，所述核酸如SEQ ID NO：20或21所示，其中当核酸是RNA时，在序列表中所示的核苷酸″T″读作″U″。

8.一种载体，所述载体包含权利要求1-7中任一项的核酸。

9.一种表位标记的丙型肝炎病毒(HCV)颗粒，其包含作为基因组的权利要求1-7中任一项的核酸。

10.一种细胞，所述细胞包含权利要求9的表位标记的丙型肝炎病毒(HCV)颗粒。

11.权利要求10的细胞，所述细胞是Huh7或来源于Huh7的细胞系。

12.纯化表位标记的丙型肝炎病毒(HCV)颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：

由权利要求10或11的细胞制备表位标记的HCV颗粒；

使含有表位标记的HCV颗粒的溶液与固定化抗表位标签抗体的支持体接触，然后使表位标记的HCV颗粒吸附到固定化抗表位标签抗体的支持体上；以及

从固定化抗表位标签抗体的支持体释放表位标记的HCV颗粒，以获得表位标记的HCV颗粒。

13.权利要求12的纯化方法，其中释放步骤包括用含有表位标签肽的缓冲液、不含钙的缓冲液、0.1M甘氨酸缓冲液(pH 2.5-4.0)、1M精氨酸HCl缓冲液(pH 4.0-5.0)或0.1-1mM HCl中的任一种从固定化抗表位标签抗体的支持体释放表位标记的HCV颗粒。

14.一种丙型肝炎病毒(HCV)疫苗，所述疫苗通过灭活权利要求9的表位标记的HCV颗粒获得。

15.一种抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体，所述抗体针对权利要求9的表位标记的HCV颗粒。