[发明专利]药物监测方法

说明书

定性和定量测定法在生命科学的不同领域中具有巨大重要性。本发明一般涉及测定生物流体中药物化合物的试剂和方法。特别地，提供了测定存在于样品中活性成分例如药物化合物的量或浓度的生物测定法。此外，提供了得到识别化合物的药物活性代谢物的结合剂的方法。相应的结合剂是药物监测法中有价值的工具。

在药理学中，使用许多药物，而不监测血中浓度或其它体液，因为其剂量一般可以根据患者接触该物质的临床反应改变。然而，该方法因一些药物而是不可能的或至少是困难的，因为药物水平不充分会导致治疗不足或耐受性，而过度水平可以是毒性的和/或损害组织。治疗药物监测是专项于测定血液或其它生物样品中药物水平化学分支。其主要着重于具有窄治疗指数的药物，即易于剂量不足或超剂量的药物。为了提供优化的治疗，监测相应的药物由此是有益的。通常需要药物监测的相应药物实例是抗-感染药例如庆大霉素和万古霉素；氨基糖苷抗生素；免疫抑制剂例如环孢素、依维莫司；抗癫痫药；抗精神病药例如氯氮平和锂、抗癌药、地高辛等。

为了实现治疗效果，特别应以提供充分抑制所涉及的酶的剂量施用作为酶抑制剂起作用的药物。然而，由于患者代谢改变，所以剂量需求也可以在患者之间显著改变。AEB071是典型和新的蛋白激酶C(PKC)同种型的选择性和强效抑制剂，其具有的ki值在nM范围。

前体药物是以具有较低乃至无药物活性的形式施用的药物化合物。一旦施用，前体药物就在体内被代谢成活性化合物。前体药物应用背后的原理一般是吸收、分布、代谢和排泄(ADME)优化。就前体药物而言，通常有必要监测足量前体药物被转化成药物活性代谢物以得到治疗效果。

在药物监测上下文中的术语“母体药物”通常表示对患者施用时药物的分子结构。一旦被吸收，母体药物就可以进行称作生物转化(代谢)的化学改变，从而产生称作代谢物的改变的分子。肠壁和肝包含最高浓度的代谢酶，它们通常被描述为微粒体酶，因为它们集中于细胞内质网内的小囊泡中。然而，酶是遍在的并且在无数其它部位催化生物转化。

母体药物及其代谢物可以具有可变程度的药理学活性，称作活性或无活性，并且其毒性也可以改变。例如，作为母体因为起作用的镇静药可以被转化成三种无活性的代谢物，还可以被转化成有活性的和镇静的，而另一种是有活性的和心脏毒性的。此外，这些分子形式各自可以显示改变的分布和消除模式。这些代谢改变使得药物化合物的药物活性浓度的检测变得困难，因为如果在检测测定中无活性代谢物得到识别，可能产生错误的结果。

为检测小分子特别设计监测/免疫测定法可能是一种挑战。这种小分子通常缺乏抗原性，使得难以产生例如结合小分子的抗体。为了增加小分子的免疫原性，可以使较大抗原化合物例如蛋白质或多肽类与药物缀合。

为了监测药物化合物，开发了监测某一浓度药物在患者中的治疗效果的诊断工。大部分已知药物监测方法利用结合药物化合物的抗体，推定它用于患者样品中的检测/监测。然而，有效监测极为困难，因为药物活性形式与例如无活性代谢物之间的正确区分对测定化合物的治疗活性浓度而言是重要的。与无活性代谢物相应的交叉反应性相关的问题是现有技术中众所周知的(例如参见Rentsch等，2006：Therapeutic drug monitoring derImmunsuppressiva)。

本发明的目的在于提供具有低概率检测药物化合物无活性代谢物的药物监测法。本发明的目的还在于提供用于研发相应特异性药物监测法，特别是用于生产适合结合剂的方法，所述结合剂例如特异性识别所监测化合物的活性形式的抗体。本发明的目的还在于鉴定和提供高概率特异性结合化合物AEB071的药物活性形式的适合结合剂。相应结合剂可以用于AEB071的药物监测法。

本发明的第一个实施方案提供了得到至少一种结合剂的方法。该结合剂结合至少一种母体化合物的药物活性形式的特异性高于结合所述母体化合物的药物无活性形式，该方法包括：

(a)通过屏蔽所述母体化合物的部分所述药物活性形式制备所述母体化合物的所述药物活性形式的至少一种衍生物；

(b)使用所述衍生物得到结合所述衍生物的一组结合剂；

(c)从所述结合剂组中选择至少一种结合剂，该结合剂结合所述衍生物以及至少一种所述母体化合物的药物活性形式。

本发明的一个方面涉及提供至少一种结合剂，它特异性结合药物化合物的药物活性形式并且具有结合无活性代谢物的低概率。

为了得到相应的特异性结合剂，本发明使用得到/获得相应结合剂的确定方法。根据一个重要的方面，不将母体化合物用于得到所述结合剂，而是使用特别设计的其衍生物。