[发明专利]用于细菌悬液的贮存的组合物和方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于贮存细菌的介质组合物和方法，其中细菌贮存的方式能够保存被贮存细菌的理想特征。

背景技术

分析发光细菌发出的光是一种对水和其它流体进行卫生监测和毒性测试的快速、有效的方法。在基于发光细菌的化验中，细菌发出的光的减少与样品中毒性物质的存在成正比。这种类型的化验是灵敏的、定量且快速的。

现有技术中可获得的系统，该系统用于在对发光细菌发出的光进行分析的基础上进行的毒性测试，通常依赖于提供活性细菌培养试液或者提供再生细菌试液(例如冻干培养物的再水化)。活性细菌培养试液可以从封闭培养或者开放生长系统中提供。

在封闭培养系统中生长的细菌，包括发光细菌，表现出各种不同的生长阶段：滞后期、加速期、指数期、减速期和死亡期。封闭式批量培养容器中含有处于细胞周期的各个阶段的微生物的混合物。在培养物的不同生长期中，微生物的数量会以不同的速率增加，且培养物最终将衰败和死亡。随着培养物中有机体数量的上升，这些有机体生存的环境改变了。许多细胞成分例如ATP、DNA和蛋白质响应这些改变，从而使得它们的生化反应(发光)中的个体差别发生变化。

在开放式生长系统中，生长基质(介质)不断输入，废物、细胞和不使用的基质不断被除去。在生长过程中可以监测一些参数例如pH值、氧、温度等，例如通过物质添加来刺激或延迟生长，从而对生长过程中发生的变化进行自动补偿。在开放式生长或者连续培养系统中，指数生长期被无限期地延长，作为连续培养的增补和脱除。

现有技术中，准连续毒性试验通常采用再水化冻干细菌悬液。美国专利5,801,052描述了用于再造干细菌的设备。

有些文献描述了发光细菌的培养，例如文献[Zavoruev and Mezhevikin(1983)Prikl.Biokhim.Mikrobiol.19，pp.564-568]。而文献[D’Souza，2001 Biosens Bioelectron.2001Aug；16(6)：337-53]则提出了一种重组细菌生物传感器系统。

美国专利6,949,382描述了一种含有肌糖和镁的细胞培养介质。

文献[Rupani et al.，Biotechnol Prog(1886)12：367-392]描述了用乙醇作为细胞生长诱导剂。

发明内容

在本发明的一个示范性实施例中，提供一种介质组合物，该组合物包括约：

NaCl/KCl(％)                       1.0-3.0；

肌糖/乳糖/海藻糖/葡聚糖(％)        0.5-7.0；

Mg/Ca(mM)                          0.0-300；

酵母提取物/酸水解酪素(％)          0.01-0.05；

牛血清白蛋白(BSA)/卵白蛋白(％)     0.02-1.0；和

乙醇/甲醇/丙醇(％)                 0.1-3.5。

选择性地，所述介质组合物包括约：

NaCl/KCl(％)                       2.0-3.0；

肌糖/乳糖/海藻糖/葡聚糖(％)        5.0-7.0；

Mg/Ca(mM)                          1.0-200；

酵母提取物/酸水解酪素(％)          0.01-0.05；

BSA/卵白蛋白(％)                   0.02-0.1；和

乙醇/甲醇/丙醇(％)                 1.0-3.5。

选择性地，所述介质组合物包括约：

NaCl/KCl(％)                       2.0；

肌糖/乳糖/海藻糖/葡聚糖(％)        5.0；

Mg/Ca(mM)                          2.0；

酵母提取物/酸水解酪素(％)          0.05；

BSA/卵白蛋白(％)                      0.05；和

乙醇/甲醇/丙醇(％)                    1.5。

选择性地，所述介质组合物包括抗生素。

选择性地，所述介质组合物为液体。

在本发明一个示范性实施例中，提供一种细菌悬液，该细菌悬液包括如上所述的介质组合物，细菌悬浮于该介质组合物中。