[发明专利]核酸序列的鉴定

权利要求书

1.一种用于检测靶核酸的方法，包括以下步骤：

(i)将单链探针核酸与目的样品在以下条件下接触：如果存在靶核酸，通过所述探针核酸与所述靶核酸的特异性杂交有效产生探针/靶核酸双链体；

(ii)将任意的探针/靶核酸双链体与核酸外切酶接触以实现所述双链体的消化并从所述双链体释放标记分子；以及

(iii)通过拉曼光谱法检测所述标记。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述核酸外切酶不具有寡核苷酸合成能力。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述探针核酸具有5’-磷酸酯基团并且所述核酸外切酶是λ核酸外切酶。

4.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中在步骤(i)中过量的所述探针核酸与目的样品接触使得步骤(ii)中双链体的消化使所述靶核酸再循环一次或多次，从而使更多的探针分子与所述靶特异性地杂交，形成额外的探针/靶核酸双链体，所述额外的探针/靶核酸双链体被消化以释放更多的标记分子。

5.如前面任意一项权利要求所述的方法，所述方法进一步包括：如果所述靶核酸存在，检测所述标记中任意的可检测到的变化，从而检测所述靶核酸。

6.如权利要求5所述的方法，其中在所述目的样品中任意靶核酸的数量参照所述变化的幅度来测定。

7.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述探针核酸是DNA。

8.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述靶核酸是DNA。

9.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述靶核酸是双链核酸。

10.如权利要求1-8任意一项所述的方法，其中所述靶核酸是单链核酸。

11.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述标记仅当通过所述探针/靶核酸双链体的消化从所述双链体核酸中释放时能够通过拉曼光谱法而被检测到。

12.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述标记是SE(R)RS活性染料。

13.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述标记是SERRS标记。

14.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述标记是荧光团。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述标记是3’羟基喹啉染料。

16.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述探针包括荧光团和在所述消化之前猝灭所述荧光团的猝灭剂。

17.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中通过拉曼光谱法的所述检测由基于等离子体光子学或荧光的检测来补充。

18.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所述探针序列附着于SE(R)RS活性基底上。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述基底是纳米颗粒的表面。

20.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中在步骤(i)中所述标记与所述探针核酸和所述目的样品接触，如果形成探针/靶核酸双链体则所述标记可嵌入至任意一个所述探针/靶核酸双链体中。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述标记可与所述双链体的小沟或大沟结合。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述标记是小沟结合物。

23.如权利要求1-19中任意一项所述的方法，其中所述标记与所述探针核酸附着、结合或以其他方式缔合。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述探针核酸与所述标记结合。

25.如前面任意一项权利要求所述的方法，其中所持探针核酸包括约20～约30个核苷酸。

26.如权利要求1-17中任意一项权利要求所述的方法，其中所述接触包括与第一探针核酸和第二探针核酸接触，其中所述第一探针核酸包括与所述靶核酸的一部分序列互补的核酸序列，和可捕获部分，所述可捕获部分允许捕获由第一探针核酸与靶核酸杂交生成的任意双链体，并且其中所述第二探针包括与所述靶核酸的与所述第一探针核酸互补的序列以外的一部分序列互补的核酸序列和所述标记。