[发明专利]增强疫苗组合物的佐剂活性的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2007年8月29日提交的美国临时专利申请号60/968,731的优先权的权益，通过引用将其全部并入本文。

引言

疫苗的根本目的是提供针对病理状态的持久的免疫力。理想地，疫苗提供功能上有活性的抗体，引发细胞-介导的免疫力，以及激活具有高度特异反应性的T-和B-淋巴细胞，还有提供针对进一步与病原体相遇的防护的“记忆”。

佐剂为疫苗添加剂，其非特异性地增加免疫应答。佐剂增强免疫系统的机制差别很大。佐剂可分类为“免疫调制的”或“抗原递送系统”。免疫调制佐剂通过调节免疫细胞的行为(通过改变淋巴因子生产)引发免疫系统。在另一方面，抗原递送系统发挥功能以递送抗原至适当的免疫细胞。此外，佐剂可增强免疫应答的速度或持续时间，调制抗体亲合力、特异性、同种型或亚类的分布，刺激细胞介导的免疫力，促进粘膜免疫力或增强免疫不成熟或老化个体中的免疫应答。佐剂能影响体液或细胞-介导的免疫应答，或二者的组合。

免疫调制(immunomodulation)指的是佐剂通过激活差异性免疫细胞子集而改变淋巴因子应答的能力。CD4+T淋巴细胞的两个主要子集——Th1和Th2——在确定免疫应答中起主要作用。典型地，Th1应答诱导补体固定抗体和强烈的迟发型超敏(DTH)反应，并且与γ-IFN、IL-2以及IL-12相关，而Th2应答导致高度循环及分泌的抗体水平，且与细胞因子IL-4、IL-5、IL-6和IL-10相关。Th1细胞的激活还通过激活细胞毒性CD8+T细胞的增殖而调节细胞免疫应答，并增强靶标细胞的细胞裂解。

已经就佐剂属性研究了脂类。与肽抗原不同，脂质由β2微球蛋白-相关分子的CD1家族加工并呈递至免疫系统。CD1分子已经进化到能捕获并加工外来和自身的脂质抗原用于显示给T细胞的特定子集。通过激活两个互补的CD1限制性T细胞子集；行使佐剂功能的自然杀伤T(NKT)细胞；能行使辅助或细胞毒性功能的非-NKTT-细胞，CD1呈递途径触发先天性和适应性免疫应答。NKT细胞表达自然杀伤(NK)细胞表面标志物以及保守的半-不变T细胞受体(TCR)，小鼠中的Vα24-Jα18/Vβ8，人中的Vα24-Jα18/Vβ11。这样，NKT细胞在大量免疫功能中起重要作用，包括抗微生物应答、抗肿瘤免疫力以及调节免疫耐受和自身免疫之间的平衡。

大量天然及合成脂质分子由抗原-呈递细胞加工并由CD1分子呈递至NKT细胞。用于研究体外和体内NKT细胞激活的原型化合物为KRN7000，以及衍生自海生海绵体(海绵(Agelas mauritianus))的α-半乳糖苷神经酰胺(“αGalCer”)。最近鉴定的另外的化合物包括异球三己糖基神经酰胺(isoglobotrihexosylceramide，″iGB3″)，其为一种内源糖脂，以及PBS-57，一种修饰的6”氨基6”脱氧半乳糖神经酰胺，如PCT申请PCT/US07/66250中描述的，其公开通过引用并入本文。这些化合物激活NKT细胞且上调体外细胞因子应答。然而，在体内免疫接种的背景中，关于这些化合物的脂质佐剂活性知之甚少。

由于毒性副作用，很少的佐剂被批准用于人疫苗。最常见的佐剂为铝和油佐剂，但已知其诱导副作用如发热、头痛、肌肉痛以及疼痛或皮疹。其他的缺点包括免疫系统强烈的局部刺激导致在注射位点的疼痛、发红、发肿或小结块。佐剂还使得疫苗制备的方法复杂化，且可能无法增加弱抗原的免疫原性。现在，用于人免疫接种的佐剂选择反映了对佐剂活性以及可接受的副作用水平之间的妥协。有对具有更少副作用，仍然诱发长期持久保护性免疫力的新佐剂的需要。

发明概述

发明人已经发现当施用于受试者时，将一种合成的糖脂，命名为PBS-57，添加到施用于受试者的疫苗制备物中激活了体液和细胞免疫应答二者。这样，本发明提供增强受试者中疫苗免疫原性的方法，通过将PBS-57和疫苗共施用于受试者刺激受试者中体液免疫应答，刺激CD4+T细胞应答以及刺激CD8+细胞毒性T细胞应答。

附图简述

图1为显示在第7天，用不同量的佐剂糖脂αGalCer、PBS20、PBS25和PBS57处理的培养的外周血淋巴细胞(PBL)的CD3+T细胞群体中NKT的百分比的图。

图2为显示在第7天，用不同量的αGalCer、PBS25、PBS57和PBS83处理的培养的PBL的CD3+T细胞群体中NKT的百分比的图。