[发明专利]包含磷酸化氨基酸、合成的磷酸化肽和胃石蛋白的稳定的无定形碳酸钙

说明书

发明领域

本发明涉及包含无定形碳酸钙的组合物及其制备方法，本发明还涉及包含磷酸化的氨基酸或肽的组合物。特别地，所述肽选自甲壳动物的蛋白质，包括GAP65、GAP22、GAP21和GAP12。本发明还提供了包含无定形碳酸钙和磷酸化的氨基酸或肽的药物组合物和营养组合物。

发明背景

钙是信号转导的核心之一，而且是生物系统中重要的结构元素。从原生动物到脊椎动物，沉积的钙盐帮助动物保持坚硬的身体形状，磷酸钙是脊椎动物的内骨骼的主要成分，碳酸钙是无脊椎动物的外骨骼的主要成分。以碳酸钙无机物作为主要组成的钙化外骨骼广泛分布于棘皮动物、软体动物和节肢动物，提供保护并用作钙储存。一些甲壳动物临时储藏无定形形式的碳酸钙，这使得碳酸钙更易获得(特别是对于蜕皮后它们的新外骨骼结构的矿化期间的快速移动来说)。无定形碳酸钙在例如螯虾的活体内的形成是相当引人兴趣的，因为无定形矿物通常是热力学不稳定的。无定形碳酸钙(ACC)倾向于转变成其多晶型物，主要是方解石和霰石。WO2005/115414使用甲壳动物器官用于提供具有可易于为人类消耗所利用的稳定ACC的组合物。考虑到钙的总体代谢重要性和生物力学重要性，并且因为ACC作为饮食补充剂是碳酸钙的潜在的更可溶和更可吸收的形式，本发明的目的在于提供制备无定形碳酸钙的新方法。

本发明的另一目的在于提供包含稳定的ACC的药物组合物和营养组合物。

本发明的其它目的和优点将随着描述的进行而显现。

发明概述

本发明涉及一种包含无定形碳酸钙(ACC)和至少一种选自磷酸化氨基酸和磷酸化肽的成分的组合物。所述磷酸化氨基酸和磷酸化肽可包含磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸或两者。所述磷酸化氨基酸和磷酸化肽能够稳定本发明组合物中的所述碳酸钙的无定形形式。一方面，本发明的所述磷酸化肽可来自甲壳动物的胃石。在一实施方式中，本发明的组合物包含ACC、至少一种磷酸化的氨基酸或肽、以及壳多糖(Chitin)或脱乙酰壳多糖(chitosan)。

另一方面，本发明涉及新的甲壳动物的肽和它们在影响碳酸钙晶态中的应用和在制备制剂中的用途。本发明还涉及所述肽的功能性片段。所涉及分离出的蛋白质包括GAP65、GAP22、GAP21和GAP12(GAP代表胃石蛋白)；本发明还提供了导出的所述新蛋白质的氨基酸序列，其被标记为SEQ.ID.NO：1至SEQ.ID.NO：4。本发明提供分离的和纯化的甲壳动物的肽，该肽基本上具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：9、SEQ I D NO：17、SEQ I DNO：24和它们的同源物的序列。本发明中，序列同源物是指具有任何插入、缺失和替换、但至少保留序列的90％的肽。本发明还包括在其序列中包含子序列的分离的和纯化的肽，所述子序列是上述甲壳动物GAP肽的片段，优选是至少10个氨基酸长的子序列。所述子序列可具有例如选自以下序列的序列：SEQ ID NO：2-8、SEQ ID NO：10-16和SEQ ID NO：18-23，或序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：9、SEQID NO：17和SEQ ID NO：24的其它片段。本发明所提供的组合物，其包含一种或多种如上定义的肽，或它们的衍生物或变异体或功能性片段或它们的混合物，以及无定形碳酸钙(ACC)。所述肽能够稳定所述组合物中所述碳酸钙的无定形形式。本文中所用的术语“功能上等同的片段、衍生物或变异体”包括具有不影响抑制碳酸钙结晶能力之修饰的肽。

本发明致力于具有选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：24的氨基酸序列的肽、以及其具有优选至少90％同源性(相同度)的序列同源物的肽。编码本发明的肽的DNA序列也是本发明的一部分。本发明提供含有如上定义的肽及其衍生物的碳酸钙制剂。

在本发明的优选实施方式中，提供了一种包含ACC的碳酸钙制剂，所述制剂保持稳定至少一个月。本发明公开了一种制备稳定的无定形碳酸钙的方法，其包含以任何顺序在水相中混合含钙的可溶盐、碳酸盐来源物和磷酸化氨基酸或磷酸化肽。所述碳酸盐来源物可例如包含溶解在液相中的碳酸盐，或所述碳酸盐来源物可包含气态二氧化碳。