[发明专利]用于多发性硬化症的标记序列及其应用

说明书

本发明涉及用于多发性硬化症的新标记序列及其诊断用途，以及依靠这些标记序列筛选用于多发性硬化症的潜在活性物质的方法。而且，本发明涉及包含该类型的用于多发性硬化症的标记序列的诊断设备，特别是蛋白生物芯片及其应用。

蛋白生物芯片在分析和诊断以及药物开发方面正获得日益增加的产业重要性。蛋白生物芯片已经被确立为筛选工具。

在单个实验中对多个特异结合分析分子的快速且高平行性的检测由此成为可能。要制备蛋白生物芯片，必须获得要求的蛋白。出于这个目的，特别地蛋白表达文库已经被建立。确定的开放读码框的高通量克隆是一种可能(Heyman，J.A.，Cornthwaite，J.，Foncerrada，L.，Gilmore，J.R.，Gontang，E.，Hartman，K.J.，Hernandez，C.L.，Hood，R.，Hull，H.M.，Lee，W.Y.，Marcil，R.，Marsh，E.J.，Mudd，K.M.，Patino，M.J.，Purcell，T.J.，Rowland，J.J.，Sindici，M.L.和Hoeffler，J.P.，(1999)，Genome-scalecloning and expressionof individual open reading frames using topoisomeraseI-mediated ligation.Genome Res，9，383-392；Kersten，B.，Feilner，T.，Kramer，A.，Wehrmeyer，S.，Possling，A.，Witt，I.，Zanor，M.I.，Stracke，R.，Lueking，A.，Kreutzberger，J.，Lehrach，H.和Cahill，D.J.(2003)Generation of Arabidopsisprotein chip for antibody and serum screening.Plant MolecularBiology，52，999-1010；Reboul，J.，Vaglio，P.，Rual，J.F.，Lamesch，P.，Mart inez，M.，Armstrong，C.M.，Li，S.，Jacotot，L.，Bertin，N.，Janky，R.，Moore，T.，Hudson，J.R.，Jr.，Hartley，J.L.，Brasch，M.A.，Vandenhaute，J.，Boulton，S.，Endress，G.A.，Jenna，S.，Chevet，E.，Papasotiropoulos，V.，Tolias，P.P.，Ptacek，J.，Snyder，M.，Huang，R.，Chance，M.R.，Lee，H.，Doucette-Stamm，L.，Hill，D.E.和Vidal，M.(2003)C.elegansORFeome version 1.1：experimental verification of the genomeannotation and resource for proteome-scale protein expression.Nat Genet，34，35-41.；Walhout，A.J.，Temple，G.F.，Brasch，M.A.，Hartley，J.L.，Lorson，M.A.，van den Heuvel，S.和Vidal，M.(2000)GATEWAY recombinational cloning：applicationto the cloning of large number s of open reading frames orORFeomes.Methods Enzymol，328，575-592)。然而，这一类型的方法与基因组测序工程和这些基因序列的注释的进展有很强的关联。而且，由于差别剪接过程，表达序列的确定可能是不明确的。这个问题可通过cDNA表达文库的应用而规避(Büssow，K.，Cahill，D.，Nietfeld，W.，Bancroft，D.，Scherzinger，E.，Lehrach，H.和Walter，G.(1998)A method for global protein expression andantibody screening on high-density filters of an arrayed cDNAlibrary.Nucleic Acids Research，26，5007-5008；Büssow，K.，Nordhoff，E.，Lübber t，C.，Lehrach，H.和Walter，G.(2000)Ahuman cDNA library for high-throughput protein expressionscreening.Genomics，65，1-8；Holz，C.，Lueking，A.，Bovekamp，L.，Gutjahr，C.，Bolotina，N.，Lehrach，H.和Cahill，D.J.(2001)A human cDNA expression library in yeast enriched for openreading frames.Genome Res，11，1730-1735；Lueking，A.，Holz，C.，Gotthold，C.，Lehrach，H.和Cahill，D.(2000)A system fordual protein expression in Pichia pastoris and Escherichia coli，Protein Expr.Purif.，20，372-378)。特定组织的cDNA由此被克隆进细菌或真核表达载体，例如，如酵母。用于表达的载体通常的特点在于，它们携带可诱导的启动子，其可以被用于控制蛋白表达的时间。而且，表达载体具有用于被称作亲和表位或亲和蛋白的序列，其在一方面，允许依靠针对所述亲和表位的抗体特异性检测重组融合蛋白，并且在另一方面，使得通过亲和层析(IMAC)的特异性纯化成为可能。