[发明专利]测量样品耐受活性氧物质(ROS)的能力的方法

权利要求书

1.测量得自人或动物有机体的生物样品的总抗氧化状态(TAS)、即其耐受活性氧物质(ROS)的能力的方法，所述方法特征在于其至少包括以下步骤：

使供试的生物样品在液体介质中接触光敏剂，形成供试混合物；

使所述供试混合物经历处于被所述光敏剂吸收的波长下的一定剂量的光照射，从而通过至少在光和光敏剂之间的光化学反应至少引起适合与所述样品协作以形成活性氧物质(ROS)的单线态氧的生成；

在照射后加入化合物，所述化合物在活性氧物质(ROS)存在下通过比色反应形成发色团或荧光物质；

测量随时间生成的发色团或荧光物质的量，以便测定所述样品通过抑制活性氧物质(ROS)而耐受它们的能力，低水平的发色团或荧光物质的生成与所述样品具有高的耐受活性氧物质(ROS)的能力相对应；

使通过将得自推定健康的有机体的参比生物样品与光敏剂混合所形成的至少一种参比混合物经历与供试混合物相同的光化学反应、比色反应以及测量反应；和

将供试混合物的测量结果与所述至少一种参比混合物获得的测量结果相比较。

2.权利要求1的方法，特征在于其包括在测量步骤期间随时间测量每种混合物从所述物质生成的光或荧光信号强度形式的发色团或荧光物质的量，所述测量步骤之后是处理所述测量结果的步骤，在该步骤期间，为每种混合物建立得自发色团物质的光信号的强度作为时间的函数的曲线，然后计算曲线下面积并测量在供试混合物和参比混合物的所述面积之间的比率。

3.权利要求1或权利要求2的方法，特征在于在使所述供试样品与参比样品接触光敏剂以便接受光照射之前，测量所述供试样品和参比样品的吸光度。

4.权利要求1-3中任一项的方法，特征在于使用生成大部分单线态氧¹O₂的光敏剂，所述光敏剂优选选自玫瑰红和四(4-磺酸根合-苯基)卟啉(TPPS)。

5.权利要求1-4中任一项的方法，特征在于光敏剂选自在无光下不与供试的生物样品反应的那些，以及特征在于所述光敏剂在与所述光敏剂的光谱最大吸收相对应的选择波长下经历照射。

6.权利要求1-5中任一项的方法，特征在于进行反应以形成发色团物质的化合物是还原的二氯荧光素-二氯荧光素体系(DCFH-DCF)。

7.权利要求1-6中任一项的方法，特征在于光化学反应和比色反应在中性或接近生物pH的pH下在恒温外壳中进行。

8.权利要求1-7中任一项的方法，特征在于得自人或动物有机体的供试的生物样品是生物流体诸如血清、血浆或在溶液中的组织提取物。

9.权利要求1-8中任一项的方法，特征在于对于每种混合物而言，生成的发色团或荧光物质的量经过不少于45分钟的时间、优选在50分钟到90分钟的范围内，以来自所述样品的光或荧光信号的强度的形式被测量。

10.用于测量得自人或动物有机体的生物样品的总抗氧化状态(TAS)、即其耐受活性氧物质(ROS)的能力的测试试剂盒，所述试剂盒特征在于其包括适于通过光化学反应至少生成适合与所述样品协作以形成活性氧物质的单线态氧的至少一种光敏剂，适于在活性氧物质的存在下形成发色团或荧光物质的试剂，以及根据权利要求1-9的方法使用它们的说明书。

11.权利要求10的测试试剂盒，特征在于该测试试剂盒至少首先包括限定至少两个隔室的支座，其次包括光敏剂和适于形成发色团或荧光物质的试剂，各自布置在所述支座的相应隔室之一中的缓冲介质中，所述间隔适于彼此连通。