[发明专利]垂枝桦花粉主要变应原的低变应原性变体

说明书

本发明提供Bet v 2蛋白质的低变应原性序列变体、编码其的核酸分子、包含其的药物组合物以及它们在预防和治疗由来自垂枝桦(Betulaverrucosa)物种的植物花粉导致的变应性疾病中的用途。

背景技术

变态反应由免疫系统功能异常导致，所述免疫系统通过产生IgE-类抗体与花粉、螨、上皮和某些食物中含有的无害蛋白质反应。

最近的数据表明西方国家中超过10％的人口患有该疾病，其症状可随时间恶化，导致例如哮喘或对其他变应原致敏，由此造成选择适当的治疗方法更加困难。

与药理学疗法不同，特定的脱敏免疫疗法(SIT)是变应性疾病的唯一病原疗法，能够顺利地改变这类疾病的特征性免疫参数。

脱敏免疫疗法包括施用增加剂量的获自导致疾病的物质的标准提取物(疫苗)(1)。这样，患者对该物质的一类免疫耐受逐步降低，随后变应性症状消失。

但是，事实上引起严重副作用的风险(2)限制特定脱敏免疫疗法在治疗变应性疾病中的应用，虽然使用缓释疫苗或使用非注射途径施用的疫苗使该风险显著降低。

近年来大部分注意力已集中在开发有效、安全的疫苗上，尤其是包含诱变处理的重组蛋白(即能够有利地影响疾病的自然进程而不导致不希望的副作用的低变应原性变体)的疫苗(3)。

如果IgG抗体对于致敏变应原是特异性的，则SIT的有利因素之一是诱导。这类(保护)抗体能够抑制抗原-IgE结合，特别是抑制IgE与Bet v 2抗原结合，改变该分子的三维构像(4，5)。包含具有未改变免疫原性的低变应原性重组蛋白的疫苗的开发将改善变应性疾病的治疗。

分类学上称为山毛榉目(Fagales)的植物(桦树、桤木、榛树、橡树、角树)的花粉是温带地区导致变应性鼻炎和哮喘的最主要原因之一。桦树花粉的两种主要变应原，Bet v 1(以登录号X15877保存在GenBank的cDNA)和Bet v 2(登录号M65179)，是分子量分别为17和14kD的蛋白质(6，7)。Bet v2属于抑制蛋白家族，其是涉及调节真核细胞细胞骨架的遍在胞质蛋白质。它们与至少两种细胞(大)分子相互作用，该至少两种细胞(大)分子即磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸，从而阻止C-γ磷脂酶(phospholypase)对该脂肪酸的水解(8)，和肌动蛋白，调控其的聚合作用(9)。抑制蛋白在成熟和萌发的花粉中的高表达暗示它们参与调节微丝前体，该微丝前体参与萌发过程(10)。抑制蛋白被认为是来自多种乔木和草本植物的花粉中的变应原，和多种水果和蔬菜中的变应原，因此抛开抑制蛋白仅在20％对花粉变应性的(过敏的)患者中发现的事实，它们被定义为“泛-变应原(pan-allergens)”(11，12)。

在大部分多种来源的植物抑制蛋白中的高序列同源性(高于60％)导致交叉致敏，不仅在来自相关植物(13)和不相关植物(14)的花粉之间，还在花粉和植物食品(aliment，15)之间，或在花粉和橡胶(latex)之间(16)。植物抑制蛋白和哺乳动物抑制蛋白之间的同源性较低，尽管证明了它们能够结合来自不同物种的肌动蛋白且显示出可交换性(17，18，19)。解释是所有的抑制蛋白具有相似的三维结构，如使用X-射线晶体学所示的(20，21，22)。

许多研究证实抑制蛋白的免疫等同物。事实上，已显示来自对确定的花粉致敏的患者的IgE能够结合不同来源的抑制蛋白，结合抑制蛋白的IgE可以相互抑制(16)。

不同花粉之间的高交叉反应性使得单独的抑制蛋白可用于变应反应诊断，重组Bet v 2通常用作选择抑制蛋白特异性IgE测定的变应原(23，24)。

存在多种测定抑制蛋白IgE表位的研究。