[发明专利]在真核生物中生产二羧酸

权利要求书

1.包含下述核苷酸序列的重组真核微生物细胞，所述核苷酸序列编码催化磷酸烯醇丙酮酸转化成为草酰乙酸从而产生ATP的酶，其中所述酶包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：5的氨基酸序列具有至少50％序列同一性的氨基酸序列。

2.根据权利要求1的细胞，其中所述酶是磷酸烯醇丙酮酸羧激酶。

3.根据权利要求1或2的细胞，其中所述酶是异源酶，优选地来自于细菌。

4.根据权利要求1到3中任一项的细胞，其中所述核苷酸序列在胞质溶胶中表达。

5.根据权利要求1到4中任一项的细胞，其中所述细胞是酵母，优选地为Saccharomyces cerevsiae，或是丝状真菌如Aspergillus niger。

6.根据权利要求1到5中任一项的细胞，其中所述细胞过表达编码丙酮酸羧化酶的核苷酸序列。

7.根据权利要求1到6中任一项的细胞，其中所述细胞还包含编码苹果酸脱氢酶的核苷酸序列，其中在编码苹果酸脱氢酶的核苷酸序列表达后，所述苹果酸脱氢酶在胞质溶胶中有活性。

8.根据权利要求1到7中任一项的细胞，其中所述细胞还包含编码下述酶的核苷酸序列，在编码催化苹果酸转化成为富马酸的酶的核苷酸序列表达后，所述酶在胞质溶胶中催化苹果酸转化成为富马酸。

9.根据权利要求1到8中任一项的细胞，其中至少一个编码琥珀酸脱氢酶的基因是无功能的。

10.根据权利要求1到9中任一项的细胞，其为包含编码SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8的磷酸烯醇丙酮酸羧激酶的核苷酸序列的Aspergillusniger。

11.根据权利要求1到9中任一项的细胞，其为包含编码SEQ ID NO：9和/或SEQ ID NO：10的磷酸烯醇丙酮酸羧激酶的核苷酸序列的Saccharomyces cerevisiae。

12.用于制备二羧酸的方法，包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到12中任一项的真核微生物细胞，并制备所述二羧酸。

13.根据权利要求12的方法，其中所述二羧酸是琥珀酸、富马酸或苹果酸。

14.根据权利要求12或13的方法，其中所述二羧酸被进一步转化为药物、化妆品、食物、饲料或化学产物。

15.包含能够通过根据权利要求12或13的方法获得的二羧酸的发酵液。