[发明专利]在真核细胞中生产琥珀酸

权利要求书

1.包含并表达下述核苷酸序列的选自酵母和丝状真菌的用于生产琥珀酸的重组真核细胞，所述核苷酸序列编码催化延胡索酸转化成琥珀酸的NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶，其中编码NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶的所述核苷酸序列表达后，所述NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶在胞质溶胶中有活性，以及

其中所述NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶与SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少99％序列同一性。

2.根据权利要求1的细胞，其中所述NAD(H)-依赖型延胡索酸还原酶来自Trypanosomasp。

3.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其中所述细胞过量表达编码丙酮酸羧化酶的核苷酸序列。

4.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其还包含编码下述苹果酸脱氢酶的核苷酸序列，在编码苹果酸脱氢酶的核苷酸序列表达后，所述苹果酸脱氢酶在胞质溶胶中有活性。

5.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其还包含编码下述酶的核苷酸序列，在编码催化苹果酸转化成延胡索酸的酶的核苷酸序列表达后，所述酶在胞质溶胶中催化苹果酸转化成延胡索酸。

6.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其还包含编码二羧酸转运蛋白的核苷酸序列。

7.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其中至少一个编码醇脱氢酶的基因是无功能的，且其中至少一个编码甘油-3-磷酸脱氢酶的基因是无功能的。

8.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其中至少一个编码琥珀酸脱氢酶的基因是无功能的。

9.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其为Aspergillus。

10.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其为Aspergillus niger。

11.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其为Saccharomyces。

12.根据权利要求1到2中任一项的细胞，其为Saccharomyces cerevisiae。

13.用于制备琥珀酸的方法，包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到12中任一项的真核细胞，其中，琥珀酸被制备。

14.用于生产食物、饲料或化学制品的方法，包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到12中任一项的真核细胞来制备琥珀酸，其中，琥珀酸被制备，并且所制备的琥珀酸被用于生产食物、饲料或化学制品。

15.用于生产聚合物的方法，包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到12中任一项的真核细胞来制备琥珀酸，其中，琥珀酸被制备，并且所制备的琥珀酸被用于生产聚合物。

16.用于生产药物或化妆品的方法，包括在合适的发酵培养基中发酵根据权利要求1到12中任一项的真核细胞来制备琥珀酸，其中，琥珀酸被制备，并且所制备的琥珀酸被用于生产药物或化妆品。

17.根据权利要求15的方法，其中所述聚合物是聚丁二酸丁二醇酯。