[发明专利]类异戊二烯的制备

权利要求书

1.制备类异戊二烯化合物的方法，该方法包含：

(a)获得多个能够生成类异戊二烯化合物的宿主细胞，该宿主细胞包含染色体整合的异源核酸序列，该异源核酸序列编码MEV或DXP途径的酶；

(b)在该宿主细胞使用乙醇作为碳源并生成类异戊二烯化合物的条件下，在培养基中培养该宿主细胞；和

(c)从该培养基中回收类异戊二烯化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中被所述宿主细胞作为碳源消耗的乙醇是由所述宿主细胞生成的。

3.如权利要求1所述的方法，其中被所述宿主细胞作为碳源消耗的乙醇是外源提供给所述培养基的。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述培养基在至少4个小时中包含浓度等于或大于约1克乙醇每升的乙醇。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞的乙醇消耗率等于或大于约0.2克到约5克乙醇每克细胞干重每天。

6.如权利要求1所述的方法，其中在所述宿主细胞在生成类异戊二烯化合物期间不限制氧气。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述培养条件包括比氧气摄入率低于10毫摩尔氧气每克细胞干重每小时的一段时间。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述培养条件包括所述对宿主细胞进行磷酸盐限制的一段时间。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞是原核细胞。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞是真核细胞。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞是真菌。

13.如权利要求11所述的方法，其中所述宿主细胞是酿酒酵母。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯化合物以大于约10克每升培养基的量生成。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯化合物以大于约50mg每克细胞干重的量生成。

16.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯化合物的量在小于约72小时中生成。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯化合物的量在小于约48小时中生成。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯化合物的量在小于约24小时中生产。

19.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯选自半萜、单萜、二萜、三萜、四萜和多萜。

20.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯是C₅-C₂₀类异戊二烯。

21.如权利要求1所述的方法，其中所述类异戊二烯选自松香二烯、紫穗槐二烯、蒈烯、α-法呢烯、β-法呢烯、法呢醇、牻牛儿醇、香叶基牻牛儿醇、异戊二烯、芳樟醇、柠檬烯、月桂烯、橙花叔醇、罗勒烯、绿叶醇、β-蒎烯、桧萜、γ-萜品烯、萜品油烯和巴伦西亚橘烯。

22.制备C₅-C₂₀类异戊二烯化合物的方法，该方法包含：

(a)获得多个能够生成该类异戊二烯化合物的宿主细胞；

(b)在乙醇含量等于或大于约1克每升培养基的培养基中，培养该宿主细胞至少四小时；和

(c)每升培养基回收至少5克该类异戊二烯化合物。

23.如权利要求20所述的方法，其中所述培养基包含约1到约5克乙醇每升培养基。

24.如权利要求20所述的方法，其中所述培养基包含约1到约20克乙醇每升培养基。

25.如权利要求20所述的方法，其中所述培养基的乙醇含量大于约20克乙醇每升培养基。

26.如权利要求22所述的方法，其中所述宿主细胞是酵母细胞。

27.如权利要求22所述的方法，其中所述培养基中的至少一部分乙醇是由所述宿主细胞生成的。